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酶工程制藥

一、酶的特性及酶工程一、酶的特性1）催化功能（催化劑共性）加快反应速度降低反應活化能不改變反應性質反應前後其數量和性質不變

2）催化效率高3）專一性強4）反應條件溫和5）酶的催化效應受調控

按催化類型分類氧化還原酶類（LDH、MAO）轉移酶類（COMT、GPT、GOT）水解酶類（ChE、pepsin）裂合酶類（carbonicanhydrase）異構酶類（topoisomeraseII）合成酶（連接酶）類（glutaminesynthetase）

二、酶工程（EnzymeEngineering）是酶學與工程學相互滲透結合、發展而形成的新的技術學科。從應用的目的出發研究酶，應用酶的特異催化功能通過工程化將相應的原料轉化成有用物質的技術。

酶工程的研究內容1）酶的分離、提純、大批量生產、應用開發2）酶和細胞的固定化及酶反應器的研究3）酶生產中基因工程技術的應用及遺傳修飾酶的研究4）酶分子改造、化學修飾、酶結構與功能關系的研究

5）有機相中酶反應的研究6）酶抑制劑、啟動劑的開發與應用研究7）抗體酶、核酸酶的研究8）模擬酶、合成酶及酶分子的設計與合成研究

二、酶的來源和生產一、酶的來源生物體中分離提純、化學合成、動/植物細胞與組織培養微生物生產1）種類多2）繁殖快、生產週期短、培養方便、可控制条件提高产量3）適應性強，經遺傳法能培育出新的高產株

二、酶的生產1）菌種的要求产酶量高，其性质符合使用要求，胞外酶不是致病菌穩定，不易退化，不易感染噬菌體利用原料價廉，發酵週期短，易於培養

2）生產菌的來源菌种保存机构或有关部门自然界分離、篩選遺傳學改良：基因突變、轉移、克隆3）目前常用的產酶微生物大肠杆菌、枯草杆菌、啤酒酵母、曲霉、其他（青黴菌、木黴菌、根黴菌、鏈黴菌）

三、酶在醫藥領域的應用診斷：GPT、AchE、葡萄糖氧化酶等治療：蛋白酶、溶菌酶、SOD、尿激酶、細胞色素c、L-天冬醯胺酶等藥物生產：青黴素醯化酶分析檢測：單酶反應、多酶偶聯反應、酶標免疫反應等

三、酶和細胞的固定化（一）固定化酶的製備1、固定化酶：限制或固定于特定空间位置的酶2、固定化酶的特點天然酶酶修飾酶化學修飾酶生物改良酶固定化酶

1）固定化酶的特點：生物催化剂功能、固相催化剂特性2）固定化酶與天然酶相比：可以多此使用，穩定性提高反應後酶與底物、產物易分離，無殘留、易純化，產品品質高反應條件易控制，適合連續化、自動化酶利用效率高，催化底物增加，用酶量減少比水溶性酶更適合多酶反應

3、酶和細胞的固定化方法通过载体等将酶限制或固定于特定的空间位置，使酶不易随水流失（即运动受限制），又能发挥催化作用的酶制剂。根據酶的應用目的和特性選擇固定方法載體結合法、包埋法、交聯法、選擇熱變性（細胞固定化）

酶、細胞的固定化方法載體結合法交聯法包埋法物理吸附法離子結合法共價結合法網格型微囊型熱處理（細胞）

1）載體結合法将酶结合于不溶性载体上物理吸附法：無機載體、天然高分子載體、大孔型合成樹脂、陶瓷、含疏水基載體。優點：易操作，可選用不同電荷與形狀載體，固定化與純化過程同時進行，酶失活後載體可再生。

缺點：最適吸附酶量無規律可循，不同載體或酶的吸附條件不同，吸附量與酶活力不一定呈平行關係，酶與載體結合力不強、易脫落，致酶活力下降並污染產物。

離子結合法：通過離子鍵結合於具有離子交換基的水不溶性載體上。多糖類離子交換劑、合成高分子離子交換樹脂。優點：操作簡單、處理條件溫和、酶的高級結構及活性中心氨基酸殘基不易被破壞、回收率較高。缺點：載體與酶結合力弱、易受緩衝液種類及pH影響、離子強度高的條件下酶易脫落。

共價結合法：酶（非活性部位：氨基、羧基、羥基、咪唑基、巰基等）以共價鍵結合（重氮化、迭氮化、酸酐活化法、醯氯法、異硫氰酸酯法、縮合劑法、溴化氫活化法、烷基化、矽烷化等）於載體上。注意：載體活化、不影響酶活性、條件溫和。特點：反應條件苛刻、操作複雜、酶的結構及活性易受影響、結合牢固。

2）交聯法用双功能或多功能试剂使酶与酶/或微生物細胞與細胞間交聯。交聯酶法、酶與輔助蛋白交聯法、吸附交聯法、載體交聯法。即酶分子內交聯、分子間交聯、輔助蛋白與酶分子交聯、酶或細胞吸附於載體上再交聯、酶與載體間交聯。

交聯劑：戊二醛、雙重氮聯苯胺-2,2-二磺酸、1,5-二氟-2,4-二硝基苯、己二醯亞胺二甲酯。N-末端α-氨基、賴氨酸的ε-氨基、酪氨酸的酚基、半胱氨酸的巰基、組氨酸的咪唑基共價鍵結合，但不需載體反應條件強烈、酶活性回收較低（降低