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(2)工藝過程:矽藻土吸附,0.02%氨水加0.1mol/L氯化鈉洗脫。QAE—Sephadex層析柱去熱原、色素。CM—C濃縮。(五)細胞色素C(CytochromeC)細胞色素C存在於自然界中一切生物細胞裏,其含量與組織的活動強度成正比。以哺乳動物的心肌、鳥類的胸肌和昆蟲的翼肌含量最多,肝、腎次之,皮膚和肺中最少。1、組成(結構)、性質細胞色素C是含鐵卟啉的結合蛋白質,鐵卟啉環與蛋白質部分比例為1∶1。豬心細胞色素C分子量12200。pI為pH10.2~10.8。細胞色素C對乾燥、熱和酸都較穩定。氧化型呈水溶液深紅色,在飽和硫酸銨中可溶解。還原型水溶液呈桃紅色,溶解度較小。2、生產工藝(1)工藝路線:人造沸石pH7.5吸附,蒸餾水和氯化鈉溶液反復洗滌,25%硫酸銨溶液洗脫。20%三氯醋酸沉澱細胞色素C,AmberliteIRC-50(NH4+)樹脂柱吸附。(六)溶菌酶(Lysozyme)溶菌酶,又稱胞壁質酶或N-乙醯胞壁質聚糖水解酶。它廣泛存在於鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁、白細胞和組織(如肝、腎)細胞內,其中以蛋清含量最豐富。溶菌酶是一種具有殺菌作用的天然抗感染物質,具有抗菌、抗病毒、抗炎症。1、組成(結構)和性質溶菌酶是一鹼性球蛋白,分子中鹼性氨基酸、醯氨殘基及芳香族氨基酸(如色氨酸)比例很高。溶菌酶能催化粘多糖或甲殼素中的N-乙醯胞壁酸和N-乙醯氨基葡萄糖之間的β-1,4糖苷鍵。溶菌酶是一種罕見的穩定蛋白質。在pH5.5加熱4h後,酶變得更活潑。低濃度的Mn(10-7mol/L)在中性和鹼性條件下能使酶免受熱的失活作用。酶類藥物?第一節酶類藥物的原料來源?一、原料選擇選用原料應注意以下幾點:(1)不同酶的用料選擇:哪里有,含量高,選哪。(2)注意不同生長發育情況及營養狀況,用微生物制酶,故需測其活力來決定取酶階段。用動物器官提取酶,則與動物年齡及飼養條件有關。(3)從原料來源是否豐富考慮;(4)從簡化提純步驟著手(5)如用動物組織作原料,則此動物宰殺後應立即取材。從動物或植物中提取酶受到原料的限制,隨著酶應用日益廣泛和需求量的增加,工業生產的重點已逐漸轉向微生物。用微生物發酵法生產藥用酶,不受季節、氣候和地域的限制,生產週期短,產量高,成本低,能大規模生產。二、微生物酶製劑高產菌株的選育菌種是工業發酵生產酶製劑的重要條件。與增加品種、縮短生產週期、改進發酵和提煉工藝條件等密切相關。優良菌種的獲得有三條途徑:①是從自然界分離篩選:②是用物理域化學方法處理、誘變;③是用基因重組與細胞融合技術。因此微生物的分離篩選是一切工作的基礎。三、微生物酶製劑生產的發酵技術首先要合理選擇培養方法、培養基、培養溫度、pH和通氣量等。還要研究酶的分離提純技術和製備工藝。(—)原料利用微生物生產酶製劑的主要原料為碳源和氮源,此外還有無機鹽、生長因素和產酶促進劑等。如果添加少量某種物質就能明顯增加酶的產量時,這類物質通稱為產酶促進劑。它們大多屬於酶的誘導物或表面活性劑。1、固體培養法固體培養法亦稱麩曲培養法,該法是利用麩皮或米糠為主要原料,另外視需要添加其他穀糠、豆餅等,加水拌成含水適度的半固態物料作為培養基。2、液體培養法液體培養法是利用液體培養進行微生物的生長繁殖和產酶。根據通氣(供氧)方法的不同,又分為液體表面培養和液體深層培養兩種。3、影響酶產生的一些因素菌種的產酶性能是決定發酵效果的重要因素,但是發酵工藝條件對產酶的影響也是十分明顯的。(1)溫度一般發酵溫度比種子培養時略高些,這樣對產酶有利。(2)pH可用糖或澱粉調節,pH低則可用氨來調節。(3)通氣(供氧)臨界氧濃度。氧必須是溶解於培養基中的氧。(4)攪拌增加液體湍流速度,減少氣泡周圍液膜厚度。有利於促進細胞的新陳代謝。(5)泡沫和消沫劑由於培養基中蛋白質分子排在氣泡表面形成一層吸附膜,聚集成泡沫層之故。(6)添加誘導劑和抑制劑誘導酶誘導酶的合成,誘導酶是該酶作用底物或者是其類似物。抑制劑促進酶的形成。加入適量表面活性劑。第二節酶類藥物的提取和純化一、生物材料的預處理(一)動物材料的預處理1、機械處理用絞肉機絞,一般細胞並不破碎。有的酶必須細胞
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