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芜湖市人民医院微生物分子检测考核及答案

一、理论考核试题

（一）单项选择题（每题2分，共20分）

1.实时荧光定量PCR（qPCR）中，SYBRGreenⅠ染料的作用机制是：

A.特异性结合双链DNA小沟区

B.与引物5’端荧光基团发生FRET效应

C.嵌入双链DNA碱基对之间发射荧光

D.标记靶序列特定区域实现信号捕获

2.结核分枝杆菌利福平耐药检测的主要靶基因是：

A.rpoB基因核心区域（81bp）

B.katG基因S315T位点

C.inhA基因启动子区

D.gyrA基因喹诺酮耐药决定区

3.核酸提取过程中，75%乙醇洗涤步骤的主要目的是：

A.裂解细胞膜释放核酸

B.去除蛋白质和盐离子杂质

C.沉淀核酸形成可见团块

D.灭活残留的DNA酶/RNA酶

4.数字PCR（dPCR）与qPCR的本质区别在于：

A.前者使用探针，后者使用染料

B.前者通过终点绝对定量，后者通过Ct值相对定量

C.前者扩增效率要求更高

D.前者检测灵敏度低于后者

5.临床样本（如痰液）进行分子检测前，常用NaOH处理的主要目的是：

A.中和样本酸性环境

B.灭活非靶标微生物

C.消化黏液提高核酸提取效率

D.增强PCR扩增特异性

6.微生物分子检测实验室污染防控中，最关键的区域划分是：

A.试剂准备区与样本处理区

B.样本处理区与扩增区

C.扩增区与产物分析区

D.试剂准备区与产物分析区

7.检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）时，选择ORF1ab和N基因双靶标的主要原因是：

A.提高检测灵敏度

B.避免引物二聚体干扰

C.降低基因变异导致的漏检风险

D.减少内参基因的使用

8.支原体PCR检测出现假阴性结果，最可能的原因是：

A.样本采集后室温放置超过2小时

B.引物设计在支原体高度保守区域

C.扩增程序中退火温度过低

D.核酸提取时加入过量蛋白酶K

9.真菌（如白色念珠菌）分子检测中，常用的靶基因是：

A.16SrRNA基因

B.18SrRNA基因

C.ITS（内转录间隔区）序列

D.β-内酰胺酶编码基因

10.微生物分子检测报告中，“未检测到靶标核酸”的规范表述应注明：

A.样本中无该微生物存在

B.检测范围内未检出目标序列

C.实验操作无异常

D.建议结合其他检测方法

（二）填空题（每空1分，共20分）

1.微生物分子检测实验室需严格分区，通常分为______、______、______和______四个功能区，各区域需单向流动，避免交叉污染。

2.核酸提取质量的关键评价指标包括______（通过紫外分光光度计检测A260/A280比值）和______（通过琼脂糖凝胶电泳观察条带完整性）。

3.qPCR扩增曲线的四个阶段为______、______、______和______，其中用于定量分析的是______阶段。

4.结核分枝杆菌XpertMTB/RIF检测采用______技术，可同时检测结核分枝杆菌核酸及______耐药突变，整个检测过程需______分钟。

5.实验室常用的防污染措施包括使用______（如UNG酶）降解扩增产物、设置______（不含模板的反应体系）、定期进行______（如次氯酸钠擦拭台面）等。

6.细菌16SrRNA基因检测的优势在于其包含______区域（用于设计通用引物）和______区域（用于种属鉴定）。

（三）简答题（每题10分，共40分）

1.简述磁珠法核酸提取的基本原理及关键操作步骤。

2.分析qPCR检测中“扩增曲线无指数增长期”的可能原因及解决措施。

3.阐述微生物分子检测室内质控的主要内容及意义。

4.对比传统微生物培养与分子检测技术在感染性疾病诊断中的优缺点。

（四）案例分析题（20分）

某患者因发热、咳嗽入院，痰液样本经革兰染色提示革兰阴性杆菌，常规培养48小时无细菌生长。实验室采用16SrRNA基因检测，扩增后电泳显示条带清晰，但测序结果提示“无有效微生物序列匹配”。请分析可能的原因及后续处理建议。

二、理论考核答案

（一）单项选择题

1.C（SYBRGreenⅠ为双链DNA嵌入染料，结合后荧光强度显著增强）

2.A（利福平耐药主要由rpoB基因核心区域突变导致）

3.B（75%乙醇可溶解残留蛋白质，洗去盐离子，避免影响后续扩增）

4.B（dPCR通过微滴分割实现单分子扩