病毒检验技术与鉴定方法.pptxVIP

第十七章

病毒检验技术;本章内容;学习目标及重点;第一节标本的采集、处理与运送;;一、病毒的分离培养.

2.鸡胚培养

;;一般选用9～14d的鸡胚;选择不同的接种部位是病毒分离成功的关键。

常用的主要有：

尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种;2.鸡胚培养;卵黄囊接种;3.动物接种;二、病毒的鉴定

（一）病毒在细胞内增殖的鉴定指标

1．细胞形态的改变

2．红细胞吸附

3．细胞培养液pH值改变

（二）病毒数量及病毒感染性测定

1．血凝试验

2．中和试验

3．空斑形成试验

4．半数感染量（ID50）和组织培养半数感染量（TCID50）

;1．细胞形态的改变

（1）细胞病变效应（cytophathiceffect，CPE）;

（2）多核巨细胞;（3）包涵体;1．细胞形态的改变

2．红细胞吸附

3．细胞培养液pH值改变;（二）病毒数量及病毒感染性测定;能使红细胞完全凝集的病毒的最高稀释倍数为该病毒的血凝效价，此效价为1个血凝单位（HAU）。

;;2．中和试验（Nt）

在体外孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再将混合物接种到敏感的宿主体内，经培养后观察CPE或红细胞吸附现象是否消失，即特异性抗体是否中和相应病毒，从而测定残存的病毒感染力的一种方法。;4．半数感染量（ID50）和组织培养半数感染量（TCID50）;第三节病毒学检测及诊断;2.电子显微镜检查：

*透射电子显微镜

用于观察病毒的大小、形态与结构及细胞内的超微结构等

*扫描电子显微镜：

用于观察病毒和细菌表面结构和附属结构等。

;H1N1流感病毒电子显微镜图片;（1）标本制备;第三节病毒的检测及诊断;2.病毒抗体的检测：已知病毒抗原多数为通过基因工程技术制备的重组抗原，其次是从患者标本中分离纯化的抗原。检测抗体的类型确定患者所处感染阶段。

-----急性期单份血清的IgM测定是诊断原发感染和早期感染。

-----IgG含量的测定应取病人急性期和恢复期双份血清，若含量升高4倍以上表明感染病毒。;三、分子生物学检测及诊断

1.核酸分子杂交技术

2.聚合酶链反应（PCR）-----多种病毒的快速诊断

3．基因芯片技术----如检测H1N1甲型流感病毒

4．基因测序----如病毒耐药基因型的检测;