基因与基因工程.pptVIP

非复制性转座第30页，共73页，星期日，2025年，2月5日复制性转座解离酶在两个转座子拷贝间将转座共整和体分开转座酶在靶位点处切成一个错开的切口，并把转座子末端切开oldnew第31页，共73页，星期日，2025年，2月5日二、断裂基因（interruptedgene）1、概念1977年，Broker和Sharp等发现了不连续基因，现已知道绝大多数真核生物基因都是不连续的，为不编码的序列隔开。2、真核基因必需切除基因中的内含子形成mRNA成熟体，翻译成蛋白质，所以在原核细胞中表达真核基因时，必需构建不含内含子的重组基因。第32页，共73页，星期日，2025年，2月5日提取细胞RNA反转录mRNAcDNAP1P2PCR扩增在E.coil或酵母中表达第33页，共73页，星期日，2025年，2月5日三、假基因（Pseudogene）G.Jacq（1977）非洲爪蟾5SrRNA基因系统研究提出的功能失活的特殊DNA序列。同正常的gene相比，绝大部分是同源的，但因存在许多突变（插入、缺失等）而阻碍了自身的表达。第34页，共73页，星期日，2025年，2月5日例：重复的假基因特点：与亲本基因连锁，同其编码区及侧翼序列的DNA有很高的同源性。产生的原因可能是由含有亲本基因的染色体区段串联重复形成。第35页，共73页，星期日，2025年，2月5日第36页，共73页，星期日，2025年，2月5日四、重复序列①不重复序列（singlecopysequence,1-3copies）copy数：在单倍体基因组里，这些序列一般只有一个或几个拷贝；含量：占DNA总量的40%－80%；长度：约750－2000bp，相当于一个结构基因的长度；特点：单拷贝基因通过基因扩增仍可合成大量的蛋白质；第37页，共73页，星期日，2025年，2月5日②中度重复序列（middlerepetitivesequence）copy数：在单倍体基因组里，这些序列一般只有10-104拷贝；含量：占DNA总量的10%－40%；特点：基因拷贝重复，多量序列相同或相似排列成串功能相同举例：rDNA,tDNA,Alufamily等第38页，共73页，星期日，2025年，2月5日非洲爪蟾的18S、5.8S及28SrRNA基因是连在一起的，中间隔着不转录的间隔区，这些单位在DNA链上串联重复约5000次。在卵细胞形成过程中这些基因可进行几千次不同比例的复制，产生2×106个拷贝，使rDNA占卵细胞DNA的75%，从而使该细胞能积累1012个核糖体。第39页，共73页，星期日，2025年，2月5日由于碱基组成的不同，各物种的DNA在CsCl梯度离心中，平衡时的浮力密度决定于G+C的含量，G+C含量高，浮力密度大。故对某一物种来说，其浮力密度曲线是覆盖一定浮力密度范围的一条宽带,高度重复序列中，有一些简单高度重复序列，G+C特别的低或高，故形成比主带略重或略轻的卫星带，叫卫星DNA卫星DNA③高度重复序列（highrepetitivesequence）——卫星DNA第40页，共73页，星期日，2025年，2月5日copy数：在单倍体基因组里，这些序列一般只有105-106拷贝；含量：占DNA总量的10%－60%；特点：基因拷贝多串联重复排列，分布于着丝粒，端粒，结构基因两侧，异染色质的成分，与染色体的稳定有关长度：约6－100bp第41页，共73页，星期日，2025年，2月5日酵母Telomeres一般以100bp左右不精确重复序列所组成。???????????????5’(TxGy)n

?????????????3’(AxCy)n??????其中X、Y一般为1－4单细胞真核生物中n常为20－100，高等真核生物中1500。真核生物端粒Telomeres第42页，共73页，星期日，2025年，2月5日散在序列

——重复单位散布在整个基因组的各个地方，中间被编码的DNA间断SINE（短散在序列）：长度小于500bpLINE（长散在序列）：长度在5～7kb第43页，共73页，星期日，2025年，2月5日F.Sanger(1977)ΦX174噬菌体DNA研究中提出的概念同一部分DNA能编码两种不同的蛋白质，不同gene的核苷酸序列有时可以共用，即其核苷酸序列是彼此重叠。修正了关于各个gene的多核苷酸链是彼此分立，互不重叠的观念。五、重叠基因第44页，共73页，星期日，2025年，2月5日