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凝血四项检测原理

凝血四项检测主要包括凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）和凝血酶时间（TT），它们从不同角度反映了机体的凝血功能状态，以下将详细阐述其检测原理。

凝血酶原时间（PT）检测原理

凝血酶原时间是反映外源性凝血系统功能的重要指标，其检测原理基于外源性凝血途径的激活过程。

外源性凝血途径是指从组织因子（TF）释放到形成TFFⅦa复合物，进而激活后续凝血因子的过程。组织因子是一种跨膜糖蛋白，广泛存在于血管外组织中。当血管受损时，组织因子暴露于血液中，与血液中的因子Ⅶ或活化的因子Ⅶa结合，形成TFFⅦa复合物。

在体外检测PT时，向被检血浆中加入含组织因子和钙离子的试剂。组织因子与血浆中的因子Ⅶ结合，迅速激活因子Ⅶ成为因子Ⅶa，形成TFFⅦa复合物。该复合物具有丝氨酸蛋白酶活性，能够激活因子Ⅹ成为因子Ⅹa。

因子Ⅹa在因子Ⅴa和钙离子的存在下，与磷脂膜表面结合形成凝血酶原酶复合物。凝血酶原酶复合物可以将凝血酶原（因子Ⅱ）激活为凝血酶（因子Ⅱa）。凝血酶具有多种重要作用，它可以将纤维蛋白原（因子Ⅰ）裂解为纤维蛋白单体，纤维蛋白单体在因子ⅩⅢa和钙离子的作用下，发生交联聚合，形成稳定的纤维蛋白凝块。

从加入组织因子和钙离子试剂到血浆开始凝固所需要的时间即为凝血酶原时间。PT的长短反映了外源性凝血系统中因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ以及纤维蛋白原的水平和功能状态。如果这些凝血因子缺乏或功能异常，如维生素K缺乏导致的凝血因子合成障碍、肝病引起的凝血因子合成减少、口服抗凝剂治疗等，都会使PT延长；而某些血栓前状态或血栓性疾病，可能会出现PT缩短的情况。

活化部分凝血活酶时间（APTT）检测原理

活化部分凝血活酶时间主要反映内源性凝血系统的功能。内源性凝血途径是指从因子Ⅻ被激活到形成因子Ⅹa的过程。

在体外检测APTT时，首先向被检血浆中加入部分凝血活酶试剂（如脑磷脂）和激活剂（如白陶土、硅藻土等）。激活剂可以激活血浆中的因子Ⅻ成为因子Ⅻa，因子Ⅻa又可以激活因子Ⅺ成为因子Ⅺa。

因子Ⅺa在钙离子的参与下，激活因子Ⅸ成为因子Ⅸa。因子Ⅸa与因子Ⅷa、钙离子和磷脂膜表面结合，形成因子ⅧaⅨaCa2?磷脂复合物，也称为内源性凝血活酶复合物。该复合物具有很强的激活因子Ⅹ的能力，能够将因子Ⅹ激活为因子Ⅹa。

此后的过程与外源性凝血途径中因子Ⅹa形成后的过程相同，即因子Ⅹa在因子Ⅴa和钙离子的存在下，与磷脂膜表面结合形成凝血酶原酶复合物，将凝血酶原激活为凝血酶，凝血酶再将纤维蛋白原裂解为纤维蛋白单体，最终形成稳定的纤维蛋白凝块。

从加入部分凝血活酶试剂和激活剂，再加入钙离子到血浆开始凝固所需要的时间即为活化部分凝血活酶时间。APTT的长短反映了内源性凝血系统中因子Ⅻ、Ⅺ、Ⅸ、Ⅷ、Ⅹ、Ⅴ、Ⅱ以及纤维蛋白原的水平和功能状态。先天性凝血因子缺乏，如血友病A（因子Ⅷ缺乏）、血友病B（因子Ⅸ缺乏）等，会导致APTT显著延长；而使用肝素进行抗凝治疗时，由于肝素可以增强抗凝血酶Ⅲ的活性，抑制凝血酶和因子Ⅹa等的活性，也会使APTT延长。相反，在高凝状态下，APTT可能会缩短。

纤维蛋白原（FIB）检测原理

纤维蛋白原是一种由肝脏合成的大分子糖蛋白，在凝血过程中起着关键作用。目前临床上常用的纤维蛋白原检测方法是Clauss法，其原理基于凝血酶对纤维蛋白原的作用。

当向被检血浆中加入一定量的凝血酶时，凝血酶会将纤维蛋白原裂解为纤维蛋白单体。纤维蛋白单体可以自动聚合形成纤维蛋白多聚体，随着反应的进行，纤维蛋白多聚体逐渐形成网状结构，使血浆发生凝固。

在Clauss法中，使用标准化的凝血酶试剂，其凝血酶活性是已知的。在一定的条件下，血浆中纤维蛋白原的含量与血浆凝固时间呈负相关。也就是说，血浆中纤维蛋白原含量越高，血浆凝固所需的时间越短；反之，纤维蛋白原含量越低，血浆凝固时间越长。

通过测量加入凝血酶后血浆的凝固时间，并与已知纤维蛋白原含量的标准血浆所测得的凝固时间进行比较，就可以计算出被检血浆中纤维蛋白原的含量。具体操作时，先制备一系列不同纤维蛋白原含量的标准血浆，分别测量它们在加入凝血酶后的凝固时间，绘制出标准曲线。然后测量被检血浆的凝固时间，根据标准曲线查得对应的纤维蛋白原含量。

除了Clauss法，还有一些其他的检测方法，如比浊法。比浊法的原理是基于纤维蛋白原在凝血酶作用下形成纤维蛋白凝块的过程中，溶液的浊度会发生变化。随着纤维蛋白凝块的形成，溶液的浊度逐渐增加，通过检测溶液浊度的变化速率，可以间接反映纤维蛋白原的含量。

凝血酶时间（TT）检测原理

凝血酶时间是指在被检血浆中加入标准化的凝血酶溶液后，血浆开始凝固所需要的时间。其检测原理主要涉及凝血酶对纤维蛋白原的作用以及血浆中可能存在的影响凝血酶作用的物质