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微生物生长的研究方法

环境因素对微生物生长的影响

微生物生长的控制;生长——微生物细胞吸收营养物质，进行新陈代谢，当同化作用大于异化作用时，生命个体的重量和体积不断增大的过程。

繁殖——生命个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。

群体生长——群体中各个个体进一步生长、繁殖。可以用重量、体积、密度或浓度来衡量。

;研究生长规律需要解决三个前提：;第一节微生物纯培养分离及生长测定方法;一、获得纯培养的方法;①稀释平板法;②平板划线分离法;连续划线;③单细胞（单孢子）分离法;④选择性培养基分离法;二、微生物纯培养生长的测定方法;1、直接法

血球计数板

涂片染色法

2、间接法（平板菌数计数法）

浇注平板法

涂布平板法;血球计数板法;染色法;浇注平板法（PourPlate）;平板涂布分离法（SpreadPlate）;干重法;;比浊法;生理指标法;第二节微生物的生长规律;由于微生物细胞极其微小，研究其个体生长存在着技术上的困难。

1、同步培养：设法使群体中的所有细胞尽量都处于同样的细胞生长和分裂周期中，然后通过分析此群体在各个阶段的生物化学特征来间接了解单个细胞的相应变化规律。

2、同步生长：通过同步培养的手段而使细胞群体中各个体处于分裂步调一致的生长状态，称为同步生长;3、获得同步生长的方法：;硝酸纤维素滤膜法;单细胞微生物的群体生长曲线;典型生长曲线：将少量单细胞的纯培养，接种到一恒定容积的新鲜液体培养基中，在适宜条件下培养，每隔一定时间取样，测细菌细胞数目。以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数为纵坐标，绘制所得的曲线。;典型的生长曲线;其它名称：停滞期、调整期、适应期

1）现象：活菌数没增加，曲线平行于横轴。

2）特点：

生长速率常数=0，细胞数目不增加

细胞形态变大或增长

细胞内RNA特别是rRNA含量增高，原生质嗜碱性增强

合成代谢活跃（核糖体、酶类、ATP合成加快），易产生诱导酶

对外界不良条件敏感，（如氯化钠浓度、温度、抗生素等化学药物）

3）原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必???的中间产物;菌种：繁殖速度较快的菌种的延滞期一般较短；

◆接种物菌龄：用对数生长期的菌种接种时，其延滞期较短，甚至检查不到延滞期；

◆接种量：一般来说，接种量增大可缩短甚至消除延滞期；

◆培养基成分：

在营养成分丰富的天然培养基上生长的延滞期比在合成培养基上生长时短；

接种后培养基成分有较大变化时，会使延滞期加长，所以发酵工业上尽量使发酵培养基的成分与种子培养基接近。

种子的损伤度;5）认识延滞期的特点及形成原因对实践的指导意义：;2、对数期（logarithmicphase）;3）对数期中的的三个重要参数：

繁殖代数、生长速率常数、代时;4）应用意义：

①由于此时期的菌种比较健壮，生产上用作接种的最佳菌龄；

②发酵工业上尽量延长该期，以达到较高的菌体密度

③是生理代谢及遗传研究或进行染色、形态观察等的良好材料。

④食品工业上尽量使有害微生物不能进入此期

;3、稳定期（stationaryphase）;①发酵生产形成的重要时期（抗生素、氨基酸等），生产上应尽量延长此期，提高产量，措施如下：

补充营养物质（补料）

调pH

调整温度

②稳定期细胞数目及产物积累达到最高。;4、衰亡期（declinephase）;什么时期菌体代谢产物最多;三、微生物的连续培养（continuousculture）;原理：当微生物在单批培养方式下生长达到对数期后期时，一方面以一定的速度流进新鲜培养基并搅拌，另一方面以溢流方式流出培养液，使培养物达到动态平衡，其中的微生物就能长期保持对数期的平衡生长状态和稳定的生长速率。;连

续

培

养

器;（三）连续培养技术——恒化连续培养;应用范围：实验室科学研究，与生长速率相关的各种理论研究;概念：通过调节培养基流速，使培养液浊度保持恒定的连续培养方法。

原理：以光电控制系统测定培养器内微生物的生长密度，从而调节新鲜培养基流入的速度来维持菌浓度不变,即浊度不变。当浊度高时，使新鲜培养基的流速加快，浊度降低，则减慢培养基的流速。

特点：基质过量，微生物始终以最高速率进行生长，并可在允许范围内控制不同的菌体密度；但工艺复杂，烦琐。;（四）连续培养技术——恒浊培养;装置;（五）连续培养优缺点;第三节影响微生物生长的环境条件;一、温度对微生物生长的影响;从微生物整体来看:

生长的温度范围一般在-10℃~100℃

极端下限为-30℃，极端上限为105~150℃

但对于特定的某一种微生物：

只能在一定温度范围内生长，在这个范围内，每种微生物都有自己的生长温度三基点:

即最低、最适、最高生长温