DB53-T 491-2013 暗褐网柄牛肝菌菌种.docxVIP

DB53T4912013暗褐网柄牛肝菌菌种

1范围

本标准规定了暗褐网柄牛肝菌（Boletusbrunneissimus）菌种的术语和定义、技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存。

本标准适用于暗褐网柄牛肝菌菌种的生产、检验和使用。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂

GB/T12728食用菌术语

NY/T528食用菌菌种生产技术规程

NY/T1742食用菌菌种真实性鉴定PCR法

3术语和定义

GB/T12728界定的以及下列术语和定义适用于本标准。

3.1暗褐网柄牛肝菌Boletusbrunneissimus

属于牛肝菌科（Boletaceae）、牛肝菌属（Boletus），子实体中等至大型，菌盖直径520cm，初半球形，后平展，表面暗褐色至深褐色，具细微绒毛；菌管层初白色，后淡黄绿色，伤处变蓝色；菌柄圆柱形，长515cm，粗13cm，表面具明显的网纹，基部稍膨大；孢子印橄榄褐色，孢子椭圆形至长椭圆形，光滑，大小为1014μm×46μm。

3.2菌种spawn

经过人工培养并用于扩大培养或栽培的暗褐网柄牛肝菌菌丝体及其载体。

3.3母种stockculture

由组织分离或孢子分离获得，经纯化培养和鉴定后，用于扩大培养的原始菌种。

3.4原种preculturespawn

由母种扩大培养而成的菌种，用于生产栽培种。

3.5栽培种cultivatedspawn

由原种扩大培养而成，直接用于栽培生产的菌种。

4技术要求

4.1母种要求

4.1.1菌落特征

在PDA培养基上，25℃±1℃条件下培养15d，菌落呈圆形，边缘整齐，菌丝体白色至淡黄色，气生菌丝发达，绒毛状，菌落直径6080mm，菌丝生长均匀，无色素分泌或色素分泌轻微。

4.1.2菌丝形态

显微镜下观察，菌丝有隔膜，分枝，直径25μm，锁状联合明显，菌丝体均匀一致，无杂菌污染。

4.1.3生理特性

最适生长温度：2325℃

生长温度范围：1530℃

最适pH值：6.06.5

生长pH范围：5.07.5

菌丝生长速度：在PDA培养基上，25℃条件下，日均生长46mm

4.2原种要求

4.2.1外观特征

菌丝体洁白至淡黄色，生长均匀，布满培养基表面，无杂菌污染，无萎缩、老化现象。培养基无收缩、无变色、无异味。

4.2.2菌丝生长状况

菌丝浓密，有光泽，呈绒毛状，生长均匀，无斑秃现象。菌丝体与培养基结合紧密，不易分离。

4.2.3培养基要求

木屑培养基：阔叶树木屑78%，麦麸20%，石膏1%，蔗糖1%，含水量60%65%

谷粒培养基：小麦粒或玉米粒98%，石膏2%，含水量50%55%

4.3栽培种要求

4.3.1外观特征

菌丝体洁白至淡黄色，生长均匀，布满培养基表面，无杂菌污染，无萎缩、老化现象。培养基无收缩、无变色、无异味。

4.3.2菌丝生长状况

菌丝浓密，有光泽，呈绒毛状，生长均匀，无斑秃现象。菌丝体与培养基结合紧密，不易分离。

4.3.3培养基要求

木屑培养基：阔叶树木屑78%，麦麸20%，石膏1%，蔗糖1%，含水量60%65%

谷粒培养基：小麦粒或玉米粒98%，石膏2%，含水量50%55%

4.4菌种活力要求

4.4.1母种活力

菌丝生长速度：在PDA培养基上，25℃条件下，日均生长46mm

菌落密度：菌丝浓密，均匀分布

菌丝颜色：白色至淡黄色，有光泽

4.4.2原种和栽培种活力

菌丝满瓶（袋）时间：在25℃条件下，3040d

菌丝生长状况：菌丝浓密，均匀，无老化现象

菌种保存期：在4℃条件下，原种保存期不超过60d，栽培种保存期不超过30d

4.5菌种纯度要求

4.5.1无菌性检验

细菌总数：≤100CFU/g

霉菌：不得检出

酵母菌：≤10CFU/g

放线菌：不得检出

4.5.2真实性鉴定

采用PCR方法鉴定，应符合暗褐网柄牛肝菌的特异性DNA片段特征。

4.6菌种遗传稳定性要求

菌种经连续转接5代后，其形态特征、生理特性和栽培性状应保持稳定，无明显变异。