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2025-11-21 发布于四川
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2025年高效液相色谱法药物分析实操考核卷及答案

考试时间：______分钟总分：______分姓名：______

一、

简述高效液相色谱法（HPLC）的基本原理。至少包含液相传质和固定相传质两个过程。

二、

在HPLC分析中，选择色谱柱时需要考虑哪些主要参数？请至少列举四个，并简述其意义。

三、

流动相的选择对HPLC分析有何重要影响？请列举至少三点流动相选择的原则。

四、

请简述在HPLC分析中，进行方法验证通常需要考察哪些项目？并说明其中至少两个项目的目的。

五、

在进行复方制剂中某种药物的含量测定时，常采用什么方法来消除其他组分的干扰？请简述其原理。

六、

固相萃取（SPE）在HPLC样品前处理中应用广泛，请简述SPE的基本原理及其主要步骤。

七、

当HPLC分析中出现以下情况时，可能的原因是什么？

（1）色谱峰不对称（拖尾）。

（2）色谱峰保留时间明显漂移。

（3）基线不稳定，出现明显噪音。

八、

使用外标法进行HPLC定量分析时，需要设置几个浓度点？为什么？

九、

某药物在HPLC分析中，其标准曲线的回归方程为Y=1000X+5.0，其中Y为峰面积，X为浓度（μg/mL）。现有一未知样品，进样后测得峰面积为10200，请计算该样品中该药物的浓度（μg/mL），并报告结果（包含单位）。

十、

在进行HPLC样品分析时，若需将样品溶液稀释100倍后进样，对于定量结果有何影响？请解释。

十一、

请简述使用HPLC进行生物样品（如血浆）中药物分析时，样品前处理的主要目的和常用方法。

十二、

在HPLC实验过程中，操作人员需要佩戴哪些个人防护用品？请至少列举三种。

试卷答案

一、

高效液相色谱法（HPLC）的基本原理是利用混合物中各组分在固定相和流动相之间不同的分配系数，当混合物随流动相通过固定相时，各组分以不同的速度移动，从而实现分离。液相传质是指样品组分从流动相转移到固定相表面，或从固定相表面转移到流动相的过程。固定相传质是指样品组分在固定相颗粒内部进行扩散和分配的过程。

二、

选择色谱柱时需要考虑的主要参数有：色谱柱长度、内径、填充物粒径、键合相类型、pH稳定性、化学稳定性、选择性好坏等。色谱柱长度和内径影响分析时间和峰容量；填充物粒径影响分析速度和柱效；键合相类型决定了分离机制和选择性；pH稳定性影响柱寿命；化学稳定性保证柱在不同流动相中的适用性。

三、

流动相的选择对HPLC分析的影响很大。选择原则包括：选择合适的极性使待测物有适当的保留时间；流动相的pH应使待测物和色谱柱键合相保持稳定，且不影响待测物的解离状态；流动相应与检测器兼容；流动相粘度要低，以减少压力损失；流动相应纯净，无杂质干扰；必要时考虑溶剂的配比和梯度程序。

四、

方法验证通常需要考察的项目有：专属性（区分待测物与杂质的能力）、线性、范围、准确度、精密度（重复性和中间精密度）、检测限（LOD）和定量限（LOQ）、耐用性等。专属性用于确认分析结果是否由待测物引起；线性表示响应与浓度在一定范围内成良好线性关系；范围是保证方法可靠性的浓度和体积区间；准确度反映测定结果与真实值的一致程度；精密度表示重复测量结果的分散程度；LOD和LOQ是方法能检测和定量待测物的最低浓度；耐用性考察方法在变动条件下的稳定性。

五、

消除复方制剂中其他组分干扰常用的方法是采用分离型色谱柱（如反相柱），通过选择合适的流动相和梯度，使待测物与其他组分得到有效分离，从而在选定的检测波长下，待测物峰与其他组分峰（或杂峰）得到基线分离或有效分离。

六、

固相萃取（SPE）的基本原理是利用固相吸附剂对样品溶液中目标分析物和干扰物的吸附特性差异，将目标分析物保留在固相上，而将干扰物洗脱掉，从而实现样品的净化和富集。主要步骤包括：活化固相吸附剂、上样（将样品溶液通过吸附剂）、洗涤（用适当的溶剂洗去干扰物）、洗脱（用洗脱液将目标分析物从吸附剂上洗脱下来）、收集洗脱液。

七、

（1）色谱峰不对称（拖尾）的可能原因：流动相pH与样品或色谱柱键合相不匹配导致离子化；固定相表面硅醇基过多或存在杂质；柱温过高；流动相中存在对样品或柱有影响的杂质；进样量过大；梯度程序设置不当。

（2）色谱峰保留时间明显漂移的可能原因：柱温不稳定；流动相组成（尤其是pH或溶剂比例）波动；流动相脱气不充分或存在气泡；色谱柱老化或污染；检测器温度或波长设置不当；进样量变化。

（3）基线不稳定，出现明显噪音的可能原因：流动相脱气不充分或存在气泡；输液泵工作不稳定；检测器光源或检测池污染；柱子或管路连接处密封不严或泄漏；流动相中存在对检测器有干扰的物质；系统高压不稳定。

八、

使用外标法进行HPLC定量分析时，通常需要设置至少三个浓度点（包含低、中、高浓度）。这样可以在所选浓度范围内获得良好的线性关