核酸理化性质分析.pdfVIP

核酸的理化性质

一、基本性质

溶解性

溶于偏碱的溶剂中，可以为乙醇沉淀，容易受机械作用力而断裂。

黏性

DNA溶液有高度的黏性。

沉降特性

核酸分子在引力场中能下沉的特性。可用超离心法纯化核酸、测分子量、

分级分离等。

核酸的理化性质

紫外吸收

嘌呤和嘧啶在260nm有特异

的吸收峰，这个性质用于核

酸的分析。

核酸的理化性质

二、核酸的变性、复性与分子杂交

变性

DNA双螺旋的有序结构受各种理化因子，如热、酸碱、变性剂、有机溶剂以及稀

释的作用，转变为无规则的线团结构。

变性的特征

增色效应,黏度和比旋下降，沉降系数增加，

生物学活性丧失。

核酸的理化性质

增色效应(hyperchromiceffect)核酸分子加热变性

时，其在260nm处的紫外吸收急剧增加的现象。

Tm值：当紫外吸收变化达到最大变化的半数值

时，此时所对应的温度称为熔解温度（Tm）、

变性温度或中点解链温度。

DNA解链曲线

核酸的理化性质

影响Tm值的因素

1.溶液的性质2.DNA中碱基组成的影响

大肠杆菌DNA在不同浓度KCl溶液下的熔融温度曲线

核酸的理化性质

复性

复性：变性DNA分开的两股链在适当条件下

重新生成双链结构的过程

退火（annealing）：热变性的DNA经缓慢

冷却复性的过程。

核酸的理化性质

分子杂交

当两条不同来源的DNA（或RNA）链或DNA链与

RNA链之间存在互补的碱基序列时，在一定条件下

可以通过互相配对形成双螺旋分子，这种分子称为

杂交分子。形成杂交分子的过程称为分子杂交（

molecularhybridization）。

核酸探针（nucleicacidprobe）：某一具有特定

序列并且用同位素或其他化学方法标记的DNA或

RNA片段。通常是人工合成的。

分子杂交图

核酸的理化性质

利用核酸探针，可以：

通过同源性比较,研究不同物种或个体DNA之间的亲缘关系；

通过杂交的严紧性,发现基因的缺失或突变；

通过标记信号的强度,测定某种遗传信息量的多少；

证明某种疾病(如肿瘤)是否与某种基因(如病毒基因)有关。