重组酶切鉴定实验.pdf

基因工程制药技术

实验八：重组克隆的酶切鉴定

实验原理：

将经质粒电泳初步鉴定的疑似重组子，借助相关基因分析软件，选择适当的酶切位

点进行相应的限制性内切酶酶切消化，然后进行琼脂糖凝胶电泳、分析出现的条带的大

小，即可判定有无目的基因的插入。

实验器材：微量移液器、恒温水溶箱、琼脂糖凝胶电泳系统、凝胶成像系统等

实验材料：待鉴定的重组子质粒、限制性内切酶、限制性内切酶缓冲液、去离子

水、凝胶加样缓冲液、琼脂糖、0.5μg/mL溴化乙啶溶液、DNA相对分子质量标准物等。

实验方法：


1.利用DNASTAR分析软件，分析目的基因和载体基因序列，挑选合适的酶切位点。

2.将重组的DNA质粒样品参考第五章限制性内切酶酶切反应，进行相应的酶切消

化。

3.混匀反应液后，稍离心使液体聚集，置37℃温育2～3h。

4.取10μL酶切消化液进行琼脂糖凝胶电泳。

5.紫外灯下观察消化效果。

注意：限制性内切酶价格比较贵，因此要注意不使其污染而导致浪费。