高效液相色谱分析技术.pptVIP

高效液相色谱分析技术*第1页，共40页，星期日，2025年，2月5日HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。ABCABC进样流动相流动相固定相流动相一.基本原理*第2页，共40页，星期日，2025年，2月5日按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可以作如下的分类：分配色谱：——分配系数亲和色谱：——亲和力吸附色谱：——吸附力离子交换色谱：——离子交换能力凝胶色谱（体积排阻色谱）：——分子大小而引起的体积排阻*第3页，共40页，星期日，2025年，2月5日分配色谱又可分为：正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。用的最多，约占60～70％。固定相又分为两类：①一类是使用最多的微粒硅胶；②另一类是使用较少的高分子微球;优点是强度大、化学惰性、使用pH范围大(pH=1～14)；缺点是柱效较小，常用于离子交换色谱和凝胶色谱。*第4页，共40页，星期日，2025年，2月5日微粒硅胶占所有柱填料的80％,它是近代高效液相色谱技术中最重要的柱填料类型。使用微粒硅胶注意事项：pH使用范围是2～7.5，若过碱（pH＞8），硅胶会粉碎或溶解；若过酸（pH＜1），键合相的化学键会断裂。硅胶键合相的优点：①硅胶的强度大②化学稳定性好③微粒硅胶的了孔结构和表面积易人为控制*第5页，共40页，星期日，2025年，2月5日按键合到微粒硅胶基质上的官能团可分为：⑴正相柱：填料为极性，官能团为－CN、－NH2等⑵反相柱：填料为非极性，官能团为烷烃，例如：C18(ODS)、C8、C4等。“C18”柱——“万能柱”填料“C18”柱即十八烷基硅烷键合硅胶填料（Octadecylsilyl简称ODS），为最常用的“万能柱”填料，可完成高效液相色谱70～80％的分析任务。*第6页，共40页，星期日，2025年，2月5日流动相：1.正相色谱常用的流动相及其冲洗强度的顺序是：正己烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜异丙醇2.反相色谱最常用的流动相及其冲洗强度如下：H2O＜甲醇＜乙腈＜乙醇＜丙醇＜异丙醇＜四氢呋喃最常用的流动相组成是：“甲醇—H2O”和“乙腈—H2O”，由于乙腈的剧毒性，通常优先考虑“甲醇—H2O”流动相。*第7页，共40页，星期日，2025年，2月5日流动相的选择原则是：①样品易溶，且溶解度尽可能大②化学性质稳定，不损坏柱子③不妨碍检测器检测，紫外波长处无吸收④粘度低，流动性好⑤易于从其中回收样品⑥无毒或低毒，易于操作⑦易于制成高纯度，即色谱纯⑧废液易处理，不污染环境*第8页，共40页，星期日，2025年，2月5日HPLC的组成Pump泵Injector/Autosampler进样器/自动进样器Column色谱柱Detector检测器DataSystem/Integrator数据系统/积分仪表Allofthesecomponentscanhaveproblemsandrequiretroubleshooting.所有这些部件都可能出现故障而需要检修。二、HPLC故障诊断*第9页，共40页，星期日，2025年，2月5日HPLC出现故障可以从多方面入手1.从部件的运转情况推测，如压力、流速的变化2.从色谱图的异常情况推测，如出峰时间、峰形3.从数据结果中分析*第10页，共40页，星期日，2025年，2月5日1.从压力变化判断（Pressure）压力无压力高压力低压力不稳定*第11页，共40页，星期日，2025年，2月5日现象判断故障排除面版灯不亮电源不通检查电源接头松脱拧紧接头泵头漏液接口太松拧紧泵头螺丝泵密封垫磨损更换密封垫泵不送溶剂泵头有气泡排气泡，溶剂需脱气使用的溶剂黏性太高换低黏性溶剂溶剂贮液器中过滤器脏清洗贮液瓶、过滤器，排空阀打开关闭排空阀控制器设定不正确设