牛骨胶原蛋白酶解物制备及其生理活性研究.pdfVIP

酶（碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶和动物蛋白水解酶），采用单酶和双酶

复配的方式对BBC进行酶解，综合酶解物蛋白和胶原蛋白的得率、回收率、分

子量，对L6细胞增殖作用和葡萄糖吸收作用等指标评价酶解效果。结果表明，

单酶酶解后产品仅得率和水解度略低于复配酶。在L6细胞模型中1mg/mL浓

下，单酶BBCH的细胞增殖效果比复配酶组好，其中胰蛋白酶酶解得到的BBCH

组增殖效果最好；同时发现单酶BBCH促进L6细胞的葡萄糖吸收的效果均显

著，也是胰蛋白酶酶解物效果最好。

4、BBCH的分离纯化及类胰岛素活性探究。利用阳离子交换色谱、C18反相

高效液相色谱对胰蛋白酶酶解得到的BBCH进行连续分离纯化，通过L6细胞葡

萄糖吸收实验，比较各组分生理活性，筛选出活性最强组分，再利用反向液相色

谱-串联质谱（RPLC-MS/MS）鉴定和表征其多肽序列，结果表明组分中多肽主要

来自牛源Ⅰ型胶原蛋白的α1（P02453）和α2（P02465）链的肽段。通过在线软件

技术预测质谱鉴定到的多肽的功能，发现它们可能具有血管紧张素转换酶（ACE）

和二肽基肽酶IV（DPPIV）的抑制活性。

以上研究结果表明，牛骨经过提取、酶解、分离纯化后能够得到有促L6细

胞葡萄糖吸收活性的BBCH，具有潜在的降血糖作用，其生理活性及作用机理值

得进一步深入挖掘。本研究为牛骨的高值化利用提供了思路。

关键词：牛骨；胶原蛋白；胶原蛋白酶解物；分离纯化；功能活性

Abstract

Bovineboneaccountsforabout20%ofthebodyweightofcattle,whichisoneof

themainby-productsofbeefindustry.Itcontainsabout20%protein,mainlytypeI

collagen,makingitagoodsourceofcollagenforpreparingcollagenpeptides.This

thesisfirstoptimizedthepretreatmentconditionstoextractbovinebonecollagen

(BBC),andthenenzymaticallyhydrolzyedcollagentoprepareBBChydrolysates

(BBCH);thehydrolysatewaspurifiedbycationexchangechromatographyand

reversedphaseliquidhighperformancechromatographyandpeptideseuqnceswere

characterizedbyLC-MS/MS;glucoseuptakepropertywasassessedusingratL6cells,

andotheractivitieswerepreductedusinganon-linesoftware.Thisthesiswasattempted

todevelopBBCHwithpotentialphysiologicalactivity,andthusprovidedascientific

basisforvalue-addedapplicationoflivestockby-products.Themainfindingsareas

follows:

1.Theinfluenceofbovinebonepretreatmentonthephysicalandchemical

propertiesofBBC.Theproximatecompositionofbovinebonewasdetermined.Bovine

bonewaspretreatedbythree