DB22-T 1997-2014 饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的测定液相色谱-串联质谱法.docxVIP

DB22T饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的测定液相色谱串联质谱法

1范围

本标准规定了饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星残留量的液相色谱串联质谱测定方法。

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和预混合饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星含量的测定。

本方法的检出限：恩诺沙星为5.0μg/kg，环丙沙星为5.0μg/kg，诺氟沙星为5.0μg/kg；定量限：恩诺沙星为10.0μg/kg，环丙沙星为10.0μg/kg，诺氟沙星为10.0μg/kg。

2原理

试样中的恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星用乙腈磷酸盐缓冲溶液提取，经HLB固相萃取柱净化，采用液相色谱串联质谱法测定，外标法定量。

3试剂和材料

除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

3.1乙腈：色谱纯。

3.2甲醇：色谱纯。

3.3甲酸：色谱纯。

3.4磷酸二氢钾。

3.5磷酸氢二钠。

3.6乙二胺四乙酸二钠（EDTA2Na）。

3.7氢氧化钠。

3.8盐酸。

3.9磷酸盐缓冲溶液（0.05mol/L，pH=7.0）：称取6.80g磷酸二氢钾和3.55g磷酸氢二钠，用水溶解并定容至1000mL，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节pH至7.0±0.1。

3.10EDTAMcIlvaine缓冲溶液：称取12.9g柠檬酸、10.9g磷酸氢二钠和37.2gEDTA2Na，用水溶解并定容至1000mL，用氢氧化钠溶液调节pH至4.0±0.1。

3.11提取液：乙腈磷酸盐缓冲溶液（3.9）（20+80，v/v）。

3.12淋洗液：甲醇水（10+90，v/v）。

3.13洗脱液：甲醇甲酸（95+5，v/v）。

3.14标准品：恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星标准品，纯度≥98%。

3.15标准储备溶液：分别准确称取恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星标准品各10.0mg，用甲醇溶解并定容至100mL，配制成100μg/mL的标准储备溶液，18℃避光保存，有效期3个月。

3.16混合标准中间溶液：分别准确吸取1.00mL恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星标准储备溶液（3.15）于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成1.0μg/mL的混合标准中间溶液，4℃避光保存，有效期1个月。

4仪器和设备

4.1液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。

4.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。

4.3离心机：转速≥10000r/min。

4.4涡旋混合器。

4.5超声波清洗器。

4.6氮吹仪。

4.7固相萃取装置。

4.8HLB固相萃取柱：200mg/6mL，或相当者。

4.9有机相滤膜：0.22μm。

4.10pH计：精度±0.02。

4.11旋转蒸发仪。

4.12恒温水浴锅。

5试样制备与保存

5.1试样制备

取具有代表性的饲料样品约500g，用粉碎机粉碎，使其全部通过0.45mm筛网，混匀，装入洁净容器中，密封备用。

5.2试样保存

试样在室温下保存，如需长期保存，应置于18℃冰箱中冷冻保存。

6分析步骤

6.1提取

称取5.0g（精确至0.01g）试样于50mL聚丙烯离心管中，加入20mL提取液（3.11），涡旋混合2min，超声提取15min，以10000r/min离心10min，取上清液于另一离心管中。残渣重复提取一次，合并上清液，待净化。

6.2净化

6.2.1HLB固相萃取柱活化：依次用5mL甲醇、5mL水活化HLB固相萃取柱，保持柱体湿润。

6.2.2上样：将6.1中的提取液以12mL/min的流速通过HLB固相萃取柱。

6.2.3淋洗：用5mL淋洗液（3.12）淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，抽干5min。

6.2.4洗脱：用5mL洗脱液（3.13）洗脱，收集洗脱液于10mL玻璃试管中。

6.2.5浓缩：将洗脱液在40℃水浴中用氮气吹至近干，用1.0mL甲醇水（20+80，v/v）溶解残渣，涡旋混合1min，经0.22μm有机相滤膜过滤，供液相色谱串联质谱测定。

6.3测定

a)色谱柱：C18柱，2.1mm×100mm，1.7μm，或相当者；

b)流动相：A为0.1%甲酸水溶液，B为乙腈；

c)梯度洗脱程序：0min，10%B；05min，10%30%B；58min，30%90%B；810min，90%B；1010.5min，90%10%B；10.515min，10%B；

d)流速：0.3mL/min；

e)柱温：40℃；

f)进样量：5μL。

a)离子源：电喷雾离子源（ESI）；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测（MRM）；

d)电喷雾电压：5500V；

e)雾化气压力：50psi；

f)干燥气流速：