DB22-T 1818-2013 蛋白质饲料中脲醛聚合物的测定.docxVIP

DB22T蛋白质饲料中脲醛聚合物的测定

1范围

本标准规定了蛋白质饲料中脲醛聚合物测定的原理、试剂、仪器设备、分析步骤、结果计算和精密度要求。

本标准适用于以豆粕、棉籽粕、菜籽粕等植物蛋白为主要原料的蛋白质饲料中脲醛聚合物含量的测定。本方法的检出限为0.05g/kg，定量限为0.15g/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6003.1试验筛技术要求和检验第1部分：金属丝编织网试验筛

GB/T14699.1饲料采样方法

3原理

试样中的脲醛聚合物在酸性条件下水解，释放出甲醛，甲醛与2,4二硝基苯肼在酸性介质中反应2,4二硝基苯腙，该化合物在碱性条件下显酒红色，于480nm波长处测定吸光度，吸光度与甲醛含量成正比，通过计算得出脲醛聚合物的含量。

4试剂与材料

除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的三级水。

4.1盐酸溶液（1+1）：将盐酸（ρ20=1.19g/mL）与水等体积混合。

4.2氢氧化钠溶液（200g/L）：称取20g氢氧化钠，溶于水中并稀释至100mL。

4.32,4二硝基苯肼溶液（1g/L）：称取0.1g2,4二硝基苯肼，溶于100mL盐酸溶液（1+11）中，棕色瓶保存，有效期一周。

4.4甲醛标准储备溶液（1mg/mL）：吸取2.8mL甲醛溶液（含量约37%~40%）于1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。用碘量法标定其准确浓度。

4.5甲醛标准使用溶液（10μg/mL）：吸取10.00mL甲醛标准储备溶液（4.4）于1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。临用时配制。

5仪器设备

5.1分光光度计：配有1cm比色皿，波长范围400800nm。

5.2分析天平：感量0.0001g。

5.3恒温水浴锅：控温精度±1℃。

5.4电动振荡器：频率100200次/min。

5.5离心机：转速≥4000r/min。

5.6试验筛：符合GB/T6003.1要求，孔径0.45mm。

5.7具塞比色管：25mL、50mL。

5.8容量瓶：50mL、100mL、1000mL。

5.9移液管：1mL、2mL、5mL、10mL、25mL。

5.10锥形瓶：250mL。

5.11烧杯：50mL、100mL、250mL。

6试样的制备与保存

6.1按照GB/T14699.1规定的方法采集具有代表性的样品，样品量不少于500g。

6.2将采集的样品充分混匀，用四分法缩分至约100g。

6.3将缩分后的样品粉碎，全部通过0.45mm试验筛，混匀后装入洁净干燥的密封容器中，室温下保存备用。

6.4试样应尽快分析，如需保存，应在04℃条件下冷藏，保存期不超过7天。

7分析步骤

7.1试样处理

将振荡后的溶液转移至离心管中，以4000r/min离心10min，取上清液备用。若上清液浑浊，需用定性滤纸过滤。

7.2水解反应

准确移取10.00mL试样处理液于50mL具塞比色管中，加入5mL盐酸溶液（1+1），混匀后置于70℃恒温水浴锅中加热水解30min，取出冷却至室温。

7.3显色反应

向水解后的溶液中加入5mL2,4二硝基苯肼溶液（1g/L），混匀后置于40℃恒温水浴锅中加热15min，取出冷却至室温。

加入5mL氢氧化钠溶液（200g/L），混匀后用水稀释至刻度，摇匀。放置10min后待测。

7.4标准曲线的绘制

分别吸取0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL甲醛标准使用溶液（10μg/mL）于一系列50mL具塞比色管中，用水稀释至10mL。

7.4测定

以试剂空白为参比，用1cm比色皿在480nm波长处测定试样溶液的吸光度。从标准曲线上查出相应的甲醛含量。

8结果计算

8.1计算公式

试样中脲醛聚合物的含量按公式（1）计算：

\[X=\frac{(m_1m_0)\timesV\timesK}{m\timesV_1}\times1000\]

式中：

\(X\)——试样中脲醛聚合物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

\(m_1\)——从标准曲线上查得的试样溶液中甲醛的质量，单位为微克（μg）；

\(m_0\)——从标准曲线上查得的空白溶液中甲醛的质量，单位为微克（μg）；

\(V\)——试样处理液总体积，单位为毫升（mL）；

\(V_1\)——测定时移取试样处理液的体积，单位