直接化学发光免疫分析用吖啶酯直接标记抗体抗原.PPTVIP

免疫检验自动化（automationofimmunoassays)

是将免疫学反应检测过程中的取样、加试剂、混合、

温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报

告和检测后的仪器清洗等步骤由计算机控制，自动化

进行。

•20世纪50-80年代:免疫学检测主要是手工操作

•20世纪80年代末:随着单克隆抗体技术、免疫标

记技术以及计算机技术的出现，自动化免疫分析

技术引入临床

-提高检测灵敏度，增加检测项目

-缩短检测时间

-提高实验结果的精确度和准确度

自动化免疫分析仪的共同特点

主机系统

样本处理试剂温育反应信号检测计算机系统

系统系统系统系统

自动稀释信号处理及信号储存

自动进样数字转换分析报告

自动清洗

免疫自动化仪器分析技术

第一节免疫浊度测定的自动化分析

第二节发光免疫测定的自动化分析

第三节荧光免疫测定的自动化分析

第四节酶联免疫测定的自动化分析

第一节免疫浊度测定的自动化分析

免疫浊度分析的基本原理是：抗原、抗体在特定的电解质溶

液中反应，形成小分子免疫复合物（19S），在增浊剂（如PEG、

NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（19S），使反应

液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复

合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增大，即

待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。

自动化免疫浊度分析

一、免疫透射比浊法

（一）原理：

一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶液

时，被其中的免疫复合物微粒吸收、反射和折射而

减弱，在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正

相关，而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和

抗体的量呈正相关。与已知浓度的抗原标准品比较，

可确定标本中抗原含量。

（二）仪器工作过程

1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。

2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准

品）与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗

原抗体反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。

3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线

拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算

出抗原浓度。

（三）方法评价

优点:

灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确

不足:

①抗体用量较大；

②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大

③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检

测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。

二、免疫胶乳比浊法

（一）原理：

用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为0.2μm），在

遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗

粒凝聚，使透射光和散射光即出现显著变化。如图所示：a为单个

胶乳颗粒不阻碍光线透过，b为抗原抗体结合形成的凝聚胶乳大颗粒

使透射光减弱或散射光增强。

（二）方法评价

本法敏感度大大高于普通比浊法，可达ng/L水平，

操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子(RF)可

与IgGFc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异

性凝集，用F(ab’)2片段代替IgG既可消除此干扰，

又可克服IgG致敏胶乳的自凝现象；免疫胶乳轻度

自凝或抗体活性降低会严重影响结果。

三、免疫散射比浊法

原理

粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光

线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散

射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒

的大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等

因素密切相关，其公式如下：

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Iθ＝I0［4π（dn/dc)Mc(1+cosθ)］

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Nγλ

式Iθ中为与入射光成θ角处散射光强度；λ和I0为入

射光的波长和强度；dn/dc为校正因子，反映了溶液

折射指数和颗粒浓度的变化；M为颗粒分子量；c为

浓度；N为阿佛加德指数；γ为颗粒到检测器的距离；

θ为散射光与入射光的夹角（散射夹角）。

散射颗粒与散射光

•两种散射：Rayleigh-散射（颗粒直径入射光波长:

均匀散射）、Mile-散射（颗粒直径≈或入射光波长: