第二章生物制药工艺技术基础.pptVIP

3．重组体的表达系统（1）原核表达系统①E.coli；②芽孢杆菌Bacillus；③链霉菌Streptomyces优点：易大量生产，成本低，周期短缺点：多为胞内表达、提取困难，易生成包含体、含起始密码Met(AUG)，有内毒素毒性第29页，共53页，星期日，2025年，2月5日（2）真核表达系统①酵母表达毕赤酵母（pichiapsatoris）受甲醇诱导优点：易培养无毒性，易高密度发酵（100g/L），高表达，成本低，产物可糖基化，有分泌表达。②动物细胞哺乳动物细胞——CHO（仓鼠细胞）昆虫细胞——家蚕细胞第30页，共53页，星期日，2025年，2月5日4．表达产物的纯化包含体inclusionbodies:大部分是表达产物，（还有细胞蛋白和膜蛋白）一级结构正确、无活性，不溶于水，可用变溶剂SDS尿素，盐酸胍溶解，再稀释透析除去变性剂，使其复性。第31页，共53页，星期日，2025年，2月5日为防止或减少包含体的形成常用方法：（1）降低培养温度从37℃降到30℃可显著降低包含体形成率。（2）以硫氧还原蛋白为载体进行融合表达。硫氧还原蛋白是E.coil的一种同源蛋白，定位于粘附区，富含-SH,可保目的蛋白不发生分子错误折叠，是一种热稳定蛋白，表达产物聚集于粘附区，通过振扰提取使产物进入介质中，再酶解就得到目的蛋白。第32页，共53页，星期日，2025年，2月5日三、酶工程制药技术基础1、酶工程(enzymeengineering)研究内容（1）酶的发现、分离纯化与生产应用。（2）酶与细胞的固定化技术与酶反应器。（3）生物酶工程：以基因工程技术和蛋白质工程技术研究酶工程。（4）抗体酶、模拟酶合成酶及酶的人工设计。（书P102）第33页，共53页，星期日，2025年，2月5日2、固定化酶(immobilizedenzyme)（1）固定化稳定性提高（2）可重复使用、提高使用效率、降低成本（3）提高强度，便于连续、自动、规模化生产（4）便于产物的分离、纯化第34页，共53页，星期日，2025年，2月5日共价键结合酶固定化间歇可溶交联包埋吸附间歇连续酶的固定化技术和固定化酶第35页，共53页，星期日，2025年，2月5日3、制备方法：（1）吸附法：分为物理吸附法和离子交换吸附法（2）包埋法：将酶或细胞定位于凝胶高聚物网络中，如卡拉胶，海藻胶，聚丙烯酰胺（3）共价键结合法：酶分子与载体分子，通过化学偶联使酶与载体共价结合。（4）交联法：用双功能试剂将酶与载体交联固定化图:酶固定化方法示意1.离子结合2.共价结合3.交联4.聚合物包埋5.疏水作用6.脂质体包埋7.微胶囊第36页，共53页，星期日，2025年，2月5日第四节生物制药工艺中试放大设计

一、中试放大目的与规模1．目的：（1）建立稳定工艺、大批量制备足量合格产品，供应临床前与临床研究；（2）研究工艺参数制定工艺规程和检定规程，为正式生产提供工艺参数，保证能在以后生产中应用。第37页，共53页，星期日，2025年，2月5日2．规模：中试是由小试转入工业化生产的过渡性研究，是取得成功产业化的关键。第38页，共53页，星期日，2025年，2月5日第二章生物制药工艺技术基础第1页，共53页，星期日，2025年，2月5日?

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一、生物材料的选择：

1．生物活性物质存在部位：胞内、胞外、胞浆、质膜、器膜、周质

2．生物材料的采集与质控

（1）品种鉴定；（2）防止污染与感染；（3）选择富集目的物材料；（4）冷冻保存

第一节生物药物提取、分离、纯化技术基础第2页，共53页，星期日，2025年，2月5日

二、生物活性物质物质常用的提取方法与优化

（一）几种常用提取方法

1．酸、碱、盐水溶液提取方法

2．表面活性剂提取方法与反胶束提取方法

3．有机溶剂提取4.双水相萃取法5．超临界萃取法

第3页，共53页，星期日，2025年，2月5日（二）提取方法与优化

1.溶剂选择

2.选择添加剂①保护剂；②酶抑制剂

3.提取条件①温度；②pH；③盐；④表面活性剂第4页，共53页，星期日，2025年，2月5日三．浓缩与