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任务二菌种的分离培养
二、母种的分离培养常用的分离方法有:组织分离法、孢子分离法和菇木分离法。
1.组织分离法(1)选种菇:菇型正常、发育健壮、中等成熟的平菇子实体,(2)种菇消毒:用75%酒精棉球擦拭表面,在接菌箱内掰开。(3)取组织:用接种针在菌盖和菌柄交界部位中间挑取一小块组织放在试管的斜面培养基中部,在25℃的恒温箱中培养,即可萌发形成菌丝,再经提纯移接于新的斜面培养基上扩大培养即成母种。
(2)孢子分离法此法为直接挑取担孢子培养或者通过孢子收集器收集孢子,然后在培养基上培养,获得母种。
利用孢子收集器分离孢子流程图132
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孢子印法分离孢子流程图12
孢子印法分离孢子流程图34
孢子印法分离孢子流程图65
(3)菇木分离法(1)将已长菇的木段带回实验室,晾干,轻轻敲掉沾附的土和杂物;(2)剥掉树皮,削去表层木质部。(3)选取菌丝洁白、浓密的部位切取菇木的中间部位,然后锯成3cm厚的薄片。带有菌丝的木块即为分离材料,带进无菌室进行分离。(4)取选好的菇木小薄片,用75%酒精擦洗表面消毒,之后放入0.1%的升汞内消毒1~2min,再用无菌水洗去升汞残液。随后将其截成如火柴梗大小的小木条,移接在斜面培养基中央。经25~27℃恒温培养,待菌丝生长后,再行转管培养。
菇木分离示意图
(三)母种培养与选择将分离得到的菌种接入试管后,放入25℃的培养箱中培养。采用组织分离法和菇木分离法,2~3天即看到菌丝生长,孢子分离法须一周左右才能用肉眼看到孢子萌发。此时即应检查菌丝生长情况,淘汰污染的及未萌发菌丝的试管,挑选菌丝发育健壮的试管分离扩大培养,即为纯菌种(母种)。
灼烧接种针剖菇体取组织接种后
(四)母种的鉴定培养培养好母种后,除用肉眼观察菌丝长势强弱外,还应做好瓶栽出菇试验。将母种接到装有灭菌棉籽皮或木屑培养基的菌种瓶内,置于25℃恒温箱中培养。菌丝长满瓶子后,置于15~18℃有光亮的地方培养。观察子实体生长情况,选择长势旺、出菇快而多的株系扩大制种。
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