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细菌总数及大肠菌群快速检测纸片：原理、制备与应用探究

一、引言

1.1研究背景与意义

在食品、饮用水等领域，微生物污染对人类健康构成了潜在威胁。微生物检测作为确保产品安全和质量的重要手段，一直受到广泛关注。传统的微生物检测方法，如培养法，虽被视为“金标准”，能够直观展示病原微生物的形态和生长特性，成本也相对较低，但其操作过程繁琐，需要经过样本采集与处理、接种、培养、观察与计数等多个步骤，且培养时间长，细菌培养通常需要24-48小时，对于一些生长缓慢的微生物甚至需要数天时间。这不仅无法满足快速检测的需求，还可能导致在检测结果出具前，不合格产品已经流入市场，给消费者健康带来隐患。例如在食品行业，传统检测方法可能使得微生物超标的食品在检测报告未出具时就已被销售，一旦发现问题，召回产品难度大，还可能引发食品安全事件。

随着人们对食品安全和水质安全关注度的不断提高，以及现代生产生活对快速检测结果的迫切需求，开发快速、准确的微生物检测技术显得尤为重要。细菌总数及大肠菌群快速检测纸片作为一种新型的检测工具，具有操作简便、检测快速、结果易于判断等优点，为解决传统检测方法的弊端提供了可能。在食品生产线上，快速检测纸片能够在短时间内对大量样品进行检测，及时发现微生物污染问题，避免大规模的产品损失；在水质监测中，也能快速反馈水质的微生物安全状况，保障饮用水安全。因此，对细菌总数及大肠菌群快速检测纸片的研究，对于保障食品安全、水质安全，以及推动相关行业的发展具有重要的现实意义。

1.2国内外研究现状

国外对细菌总数及大肠菌群快速检测纸片的研究起步较早，技术相对成熟。20世纪50年代，德国科学家FORG首次发明了大肠菌群快速测试纸片法。美国3M公司在该领域取得了突破性进展，其生产的Petrifilm微生物检测产品，如菌落总数测试片和大肠杆菌/大肠菌群测试片，在食品、饮料等行业广泛应用。这些测试片以亲水性吸附物质作为培养基质，含有测试菌生长所需营养物、染色剂和显色剂，不仅操作简单，还能缩短检测时间，提高检测效率，且具有标准化的测试方法，克服了传统方法因培养基批次、配制条件和人员差异导致的结果差异性问题。此外，一些欧洲国家也在不断优化快速检测纸片的配方和性能，提高检测的准确性和灵敏度。

国内对细菌总数及大肠菌群快速检测纸片的研究始于20世纪80年代。天津卫生防疫站为保障饮水安全，自主研发了水中细菌检测纸片，后续发展为菌落总数快速测试片，采用中速定性滤纸作为载体，TTC作为显色剂，通过红色菌落数量统计细菌总数。此后，国内众多实验室和生物科技公司加大研究投入，开发出多种适用于食品微生物检测的大肠菌群快速测试片，深圳等地已有多家科技公司实现产品化。目前，国内在快速检测纸片的研究上，一方面注重对国外先进技术的引进和吸收，另一方面积极探索适合国内实际需求的创新技术，努力实现检测纸片的标准化、规范化生产。

尽管国内外在细菌总数及大肠菌群快速检测纸片的研究和应用方面取得了一定成果，但仍存在一些不足。部分检测纸片在检测复杂样品时，容易受到样品中杂质的干扰，导致检测结果不准确；对于低浓度微生物样品的检测灵敏度有待提高；不同品牌和类型的检测纸片在质量稳定性上存在差异；而且，在检测纸片的判读标准上，国内外尚未完全统一，影响了检测结果的通用性和可比性。本文旨在针对这些问题，进一步研究和优化细菌总数及大肠菌群快速检测纸片的性能，建立更加准确、可靠的检测方法和判读标准。

二、细菌总数及大肠菌群快速检测纸片的检测原理

2.1细菌总数检测纸片原理

细菌总数检测纸片的核心原理是基于细菌在适宜的营养环境中生长繁殖，并通过特定的显色反应来指示细菌的存在和数量。检测纸片上加载了营养培养基、凝胶和显色剂，其中显色剂常用的是氯化三苯基四氮唑（TTC）。当样品接种到检测纸片上后，细菌利用纸片上的营养培养基开始生长繁殖。在细菌的代谢过程中，会产生各种酶，其中脱氢酶能够与TTC发生反应。TTC本身是无色的，但在脱氢酶的作用下，接受氢后被还原成红色的三苯甲臢（TTF）。随着细菌的不断生长，产生的脱氢酶增多，与TTC反应的程度也随之加深，从而在细菌生长的位置形成红色菌斑。通过计数这些红色菌斑的数量，就可以推算出样品中的细菌总数。例如，在对一份牛奶样品进行细菌总数检测时，将牛奶样品均匀接种到细菌总数检测纸片上，在适宜的温度下培养一段时间后，纸片上会出现一个个红色的菌斑，每个菌斑代表一个细菌菌落，通过统计这些菌斑的数量，就能得出牛奶中细菌的大致含量。这种检测原理使得细菌总数检测纸片能够快速、直观地反映样品中的细菌污染情况，为食品、水质等领域的微生物检测提供了便捷的方法。

2.2大肠菌群检测纸片原理

大肠菌群检测纸片的检测原理主要基于大肠菌