MCTopo-loop LTP DNA文库制备技术流程概要.pdfVIP

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2025-12-11 发布于北京
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MCTopo-loop LTP DNA文库制备技术流程概要.pdf

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手册

MCTopo‑loopLTP‑Seq试剂盒

1.末端修复和去磷酸化

1.1反应

5xCutsmart缓冲液/dNTP20uLT4

聚合酶3uL1‑5ugHOx总计

100uL

•20°C15分钟，75°C10分钟反应

100uLCIP3uL总计103uL

•50°C30分钟

1.2纯化

末端修复反应103uL

MCLAB纯化磁珠160uL

总计260微升

•在混合仪上孵育5分钟，用新鲜的80%乙醇洗涤两次，并让珠子在室温下干燥。尽

量避免过度干燥珠子。加入15微升洗脱缓冲液，并在Topo连接前在室温下静置5分钟。

2.Topo连接

向珠子中的15ul洗脱液中加入以下成分。

珠子中的洗脱液15

Topo/连接酶3

ATP/盐6

总计24

•用移液器混合10次。

•在室温下孵育5分钟。

2.2纯化

Topo连接反应24uL

MCLAB珠结合缓冲液28.8微升

Manual

MCTopo-loopLTP-SeqLibraryPrepKit

1.EndRepairandde-phosphorylation

1.1Reaction

5xCutsmartBuffer/dNTP20uL

T4Polymerase3uL

1-5ug

HOx

Total100uL

•20°Cfor15min,75°Cfor10min

RXN100uL

CIP3uL

Total103uL

•50°Cfor30min

1.2Cleanup

Endrepairreaction103uL

MCLABlibrarypurifyBeads160uL

Total260uL

•Incubateonmixerfor5min,washtwicewithfresh80%ethanolandallowthebeadsto

dryatroomtemperature.Trytoavoidover-dryingbeads.Add15uLelutionbufferand

leaveitonbenchfor5minbeforeTopolii

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