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高灵敏核酸扩增技术赋能生物传感：原理、应用与展望

一、引言

1.1研究背景与意义

在生命科学与分析化学的前沿探索中，高灵敏核酸扩增技术与生物传感技术正逐渐成为推动多领域发展的关键力量。高灵敏核酸扩增技术能够在极微量的样本中，对特定核酸序列进行指数级扩增，使其从难以检测的状态转变为可精确分析的对象，为深入探究生命奥秘提供了有力工具。生物传感技术则通过巧妙地将生物识别元件与物理或化学换能器相结合，实现了对生物分子的快速、准确检测，在医学、环境监测、食品安全等诸多领域展现出巨大的应用潜力。

二者的结合，更是为生物分析领域带来了前所未有的突破。在医学诊断领域，能够实现对疾病的早期精准诊断，例如在癌症早期，肿瘤细胞释放到血液中的核酸标志物含量极低，高灵敏核酸扩增技术与生物传感技术的融合，可将这些痕量核酸扩增并精准检测，为患者争取宝贵的治疗时间，显著提高治愈率。在环境监测方面，可快速检测环境样本中的微生物核酸，及时发现水源、土壤中的病原体污染，为生态环境保护提供重要依据。在食品安全领域，能够灵敏地检测食品中的致病微生物、转基因成分等，保障消费者的饮食安全。因此，深入研究高灵敏核酸扩增技术在生物传感中的应用，对于推动多领域的发展、提升人类生活质量具有深远的意义。

1.2国内外研究现状

在国外，高灵敏核酸扩增技术在生物传感中的应用研究开展得较早且成果丰硕。美国的科研团队利用数字PCR技术与微流控生物传感器相结合，实现了对单个细胞内核酸的精准定量分析，为单细胞测序和癌症早期诊断提供了新的技术手段。欧洲的研究机构则专注于开发基于等温扩增技术的生物传感器，如将重组酶聚合酶扩增（RPA）与电化学传感器相结合，在无需复杂温控设备的情况下，实现了对病原体核酸的快速检测，检测时间可缩短至30分钟以内，大大提高了检测效率，适用于现场快速检测场景。

国内在该领域的研究也取得了长足的进步。中国科学院的科研人员通过对核酸扩增引物和探针的优化设计，结合纳米材料增强的光学传感技术，开发出高灵敏的核酸生物传感器，对病毒核酸的检测限达到了单拷贝水平，在传染病防控中发挥了重要作用。一些高校研究团队致力于将高灵敏核酸扩增技术与智能手机平台相结合，开发便携式生物传感检测设备，实现了对疾病标志物的现场快速检测，为基层医疗诊断提供了便捷的解决方案。然而，目前国内外研究仍面临一些挑战，如检测成本较高、检测通量有待进一步提高、不同技术之间的兼容性和稳定性还需优化等问题，这些都为后续研究指明了方向。

1.3研究目的与创新点

本研究旨在深入探索高灵敏核酸扩增技术在生物传感中的创新应用，开发新型的生物传感检测方法和平台，以实现对生物分子的更快速、更灵敏、更准确的检测。

在创新点方面，本研究将探索新的应用方向，例如将高灵敏核酸扩增技术应用于生物标志物的动态监测，通过实时跟踪生物标志物的变化，为疾病的发展进程和治疗效果评估提供更全面的信息。同时，致力于改进技术结合方式，尝试将多种核酸扩增技术与不同类型的生物传感器进行优化组合，如将环介导等温扩增（LAMP）技术与场效应晶体管生物传感器相结合，充分发挥LAMP技术等温扩增、快速高效的优势和场效应晶体管生物传感器高灵敏度、易集成的特点，有望突破传统检测方法的局限，提高检测的灵敏度和特异性。此外，还将在降低检测成本、提高检测通量方面进行创新，通过设计低成本的生物传感材料和构建高通量的检测芯片，使高灵敏核酸扩增技术在生物传感中的应用更加广泛和实用，为相关领域的发展提供新的技术支撑。

二、高灵敏核酸扩增技术与生物传感技术基础

2.1高灵敏核酸扩增技术概述

2.1.1技术原理与分类

高灵敏核酸扩增技术是现代分子生物学领域的关键技术，旨在实现对痕量核酸的高效扩增，为后续检测与分析提供充足的样本。其中，聚合酶链式反应（PCR）作为最为经典的核酸扩增技术，由美国科学家KaryMullis于1985年发明，其原理是基于DNA的半保留复制特性，在体外模拟体内DNA复制过程。通过高温变性使双链DNA解旋为单链，低温退火让引物与单链模板特异性结合，中温延伸阶段在DNA聚合酶的作用下，以脱氧核苷酸为原料，按照碱基互补配对原则合成新的DNA链。如此经过多轮循环，特定DNA片段得以指数级扩增，如在新冠病毒检测中，PCR技术能够快速扩增病毒的核酸片段，从而实现对病毒的精准检测。

数字PCR（dPCR）是近年来发展起来的新一代核酸定量技术，它将PCR反应体系分散成数万个独立的微反应单元，每个单元中最多含有一个或零个目标核酸分子。经过扩增后，通过对每个微反应单元的荧光信号进行检测和统计分析，直接计算出目标核酸分子的绝对数量，实现绝对定量。例如，在肿瘤基因检测中，数字PCR可以精确检测肿瘤细胞中特定基因的拷贝