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细胞免疫治疗中心SOP—质控CIK细胞检测的标准操作规程

版本号：1.02013-10-08第PAGE1页/共NUMPAGES7页

质控CIK细胞检测的标准操作规程

编号

XK-CI-XB-ZK-01

版本号

1.0

执行日期

2016-08-01

起草人

侯燚

审核人

傅瑾

批准人

夏惠群

批准人签名

变更版本号

变更日期

变更原因及目的

【背景】

CIK是“Cytokine-InducedKillerCells”的缩写，中文全称为“细胞因子诱导的杀伤细胞”。CIK是单个核细胞在CD3单抗和多种细胞因子(包括IFN-g,IL-2等)的作用下培养获得的一群以CD3+CD56+细胞为主要效应细胞的异质细胞群，其既具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性，又具有NK细胞(自然杀伤细胞)的非MHC(主要组织相容性抗原)限制性肿瘤杀伤能力。CIK细胞具有杀瘤活性高、杀瘤谱广，对正常组织毒性低，体外可高度扩增等特点，是目前临床上广泛使用的过继性免疫治疗细胞。

【目的】

制定细胞免疫治疗实验室所制备的CIK的质控检测标准操作规程。

【适用范围】

本标准操作规程适用于细胞免疫实验室所制备的CIK质控检测标准操作规程。

【规定】

CIK细胞质量指标包括：每批细胞应注明来源并加以标记或确定批号；?细胞数量应满足临床最低需求，存活率应不低于80%；纯度和均一性达到临床应用水平；体外检测细胞具备正常功能和生物学效应，如细胞具有的某种生物学功能，分泌某种产物的能力，表达某种标志的水平等。

细胞制品外源因子的检测包括：细菌、真菌、支原体和内毒素。参照现行版《中国药典》生物制品相关规程进行。

无菌试验：每批培养的细胞在患者输注前均应进行无菌试验。建议在培养开始后3～4d起每间隔一定时间取培养液样品，包括患者回输前48h取样，按现行版《中国药典》生物制品无菌试验规程进行。在患者使用前，取培养液及/或沉淀物用丫啶橙染色或革兰染色，追加一次污染检测。进行长期培养的细胞，应进行支原体检查。对每一批细胞终制剂应留样检测。如果留样发现阳性结果，应及时对生产过程进行检查。如果在细胞制备的早期发现有污染的情况，应终止该批细胞制品的继续制备。细胞制备实验室应具有自体CIK细胞制备及检定过程的原始记录和检定报告，并永久保存与档案文档中。审核人员在收到标准操作规程三个星期内应提交已签名的标准操作规程签名页。

【规程】

材料与试剂

1.1材料

CIK细胞样品（由CIK组在回输当天提供）

移液器与枪头

1.5mLep管

BD流式管

1.2试剂

抗体：

名称

简称

品牌

货号

PEanti-humanCD8aAntibody

CD8PE

biolegend

300908

APCanti-humanCD56(NCAM)Antibody

CD56APC

biolegend

318310

PEanti-humanCD16Antibody

CD16PE

biolegend

302008

FITCanti-humanCD3Antibody

CD3FITC

biolegend

300406

FITCanti-humanCD45ROAntibody

CD45ROFITC

biolegend

304204

APCanti-humanCD45ROAntibody

CD45ROAPC

biolegend

304210

APCanti-humanCD197(CCR7)Antibody

CCR7APC

biolegend

353214

APCanti-humanCD4Antibody

CD4APC

BD

555349

FACSbuffer（2%HABserum+PBS）

实验准备

2.1FACSbuffer的配置

取50mL离心管加入49mLPBS,再加入1mLHABserum,配成含2%serum的FACSbuffer。

2.2BDFACSCalibur开机操作及上样前准备。

参考“BDFACSCaliburInstructionsforuse”58。

顺序

染色抗体

备注

1

none

作为NC(negativecontrol)

2

CD8PE

单染PE调补偿

3

CD3FITC

单染FITC调补偿

4

CD3FITC-CD16PE-CD56APC

检测样品

5

CD8PE-CD3FITC-CD45ROAPC

检