gp350蛋白修饰的红细胞胞胞外囊泡泡靶靶向治疗疗Burkiitt淋巴瘤的作用及机制.pdfVIP

浙江大学硕士学位论文中文摘要

gp350蛋白修饰的红细胞胞外囊泡靶向治疗

Burkitt淋巴瘤的作用及机制

浙江大学医学院免疫学

硕士研究生彭艳梅

导师王建莉

中文摘要

Burkitt淋巴瘤是临床上常见的血液系统恶性肿瘤之一，具有生长速度快，侵袭

性强的特点。此类患者长期生存率较低，且病情易反复，预后极差。该病的发病

机制与爱泼斯坦-巴尔病毒感染有关，病毒通过包膜糖蛋白gp350与补体受体CD21

结合，侵入并感染B淋巴细胞，对肿瘤的发生发展具有一定的促进作用。目前，

化疗是Burkitt淋巴瘤主要的治疗手段之一，但其副作用明显，对机体正常细胞损

害极大。寻找高效低毒的方法是治疗Burkitt淋巴瘤的主要难题。

细胞外囊泡（extracellularvesicles，EVs）是一种生物来源的纳米囊泡。生理

状态下，EVs的双层膜结构能保护其内容物免受核酸酶、蛋白酶的降解。EVs膜

上蛋白受体可以和靶细胞膜上的配体特异性结合，实现信息的靶向传递。这使得

EVs有潜力成为理想的药物转运载体。根据以上研究背景，本研究拟针对gp350

蛋白与CD21分子特异性结合的特点，设计一种gp350蛋白修饰的EVs载药体系，

评估其靶向治疗CD21+Burkitt淋巴瘤的疗效，并进一步探讨其作用机制。

在本研究中，我们首先在体外构建pcDNA-gp350-FLAG融合蛋白表达质粒，

在293T细胞中过表达后获取的EVs称为293T-EVs/gp350。以流式细胞技术、免

疫荧光染色等方法检测293T-EVs/gp350的表征及肿瘤细胞对其的摄取能力，结果

表明CD21+Burkitt淋巴瘤细胞Raji对293T-EVs/gp350的摄取能力明显增强。由于

人血红细胞来源的EVs（RBC-EVs）免疫原性低，来源丰富，可以大量制备，接

III

浙江大学硕士学位论文中文摘要

下来的研究改用RBC-EVs。我们以共孵育及电穿孔方法使RBC-EVs荷载gp350

蛋白，通过免疫印迹方法、透射电镜和纳米颗粒跟踪分析仪检测发现，电穿孔获

取的RBC-EVs/gp350和293T-EVs/gp350具有相似的表征。将RBC-EVs/gp350与

CD21+的Raji细胞共孵育后，流式细胞技术和免疫荧光染色结果显示

RBC-EVs/gp350同样具有靶向Raji的能力。同时，我们构建小鼠皮下肿瘤模型，

荧光切片显示RBC-EVs/gp350可以有效地提高其对CD21+Burkitt肿瘤的靶向性。

另外，我们利用电穿孔方法将化疗药物阿霉素（Doxorubicin，DOX）载入

RBC-EVs/gp350中，构建药物载体。以流式细胞技术和高效液相色谱等方法检测

RBC-EVs和RBC-EVs/gp350的DOX负载效率，发现两者效率接近。通过CCK-8

检测发现，RBC-EVs/gp350/DOX对Raji细胞活力有更强的抑制作用。接着，我们

用裸鼠构建Burkitt皮下荷瘤小鼠，对肿瘤生长情况及小鼠生存率监测发现，

RBC-EVs/gp350/DOX对Raji肿瘤生长的抑制效果强于RBC-EVs/DOX，且前组小

鼠的生存率更高。肿瘤组织TUNE和Ki67染色结果显示RBC-EVs