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基础医学实验操作步骤详细解析

基础医学实验是探索生命现象、揭示疾病机制的重要手段，其操作的规范性、准确性直接关系到实验结果的可靠性与科学性。对于初入实验室的研究者而言，熟练掌握基础操作技能是开展科研工作的第一步。本文将详细解析几项最常用的基础医学实验操作，旨在为实验者提供一份实用的操作指南与理论参考。

一、实验室安全与个人防护

在任何实验开始之前，实验室安全与个人防护是必须首要强调的原则，这不仅是对实验者自身的保护，也是保证实验环境稳定与实验结果不受污染的基础。

进入实验室必须身着实验服，长袖长裤，覆盖全身皮肤，防止化学试剂溅落或生物样本接触。根据实验需求，佩戴合适的防护眼镜或面罩，尤其在进行可能产生飞溅、气溶胶或强光的操作时。手部是最容易接触危险物质的部位，应根据实验类型选择一次性乳胶手套、丁腈手套或耐酸碱手套，并在操作不同类型试剂或样本后及时更换，避免交叉污染。长发需束起，不佩戴戒指、手镯等饰品，不穿露趾鞋。

实验开始前，应仔细阅读实验指导书及所用试剂的安全技术说明书（MSDS），了解试剂的理化性质、毒性及应急处理方法。实验台面需保持整洁，仅放置实验必需物品。对于挥发性、毒性或腐蚀性试剂，应在通风橱内操作。实验过程中严禁饮食、吸烟及用手触摸口鼻眼。

熟悉实验室应急设备的位置与使用方法，如洗眼器、紧急喷淋装置、灭火器、急救箱等。一旦发生意外，如化学灼伤，应立即用大量流动清水冲洗受影响部位，并及时报告实验室负责人并寻求医疗帮助；若发生生物污染，应立即按照特定的生物安全规程进行处理。

二、玻璃器皿的清洗与灭菌

洁净的实验器皿是获得准确实验结果的前提，而灭菌则是防止微生物污染，特别是在细胞培养、微生物实验中的关键步骤。

（一）玻璃器皿的清洗

新购置的玻璃器皿表面常附有游离碱和灰尘，使用前需先用自来水冲洗，再用1%-2%的盐酸溶液浸泡数小时，以中和碱性物质，随后用自来水彻底冲洗，最后用蒸馏水冲洗2-3次，倒置沥干。

对于使用过的污染器皿，若含有大量有机物（如血清、培养基），应先用自来水冲洗去除大部分残渣，再用合适的洗涤剂（如洗洁精、铬酸洗液，后者因强腐蚀性需谨慎使用）浸泡或刷洗。刷洗时宜用软毛刷，避免刮伤器皿内壁。特殊顽固污渍可采用超声清洗仪辅助清洗。

清洗后的器皿，先用自来水充分冲洗，直至无洗涤剂残留，内壁能均匀挂住一层水膜而不形成水珠。最后用蒸馏水或去离子水润洗2-3次，以去除自来水中的矿物质离子。洗净的器皿应倒置在专用架上自然晾干，或置于烘箱中烘干。

（二）玻璃器皿的灭菌

干热灭菌是常用方法之一，适用于耐高温且不怕干燥的器皿，如烧杯、试管、培养皿等。将洗净干燥的器皿放入干热灭菌箱内，注意物品间留有空隙，利于热空气流通。关闭箱门，设定温度至____℃，灭菌时间通常为2-3小时。达到时间后，切断电源，待温度自然冷却至60℃以下方可取出，以防器皿骤冷破裂及污染。

高压蒸汽灭菌则适用于能耐湿热的器皿，如锥形瓶、移液管、橡胶制品及部分培养基。将器皿用牛皮纸或专用灭菌袋包装好，放入高压蒸汽灭菌锅内。加水至指定刻度（注意使用蒸馏水，防止水垢），放入待灭菌物品，盖紧锅盖，打开排气阀，加热至沸腾，排尽锅内冷空气后关闭排气阀。继续加热，当压力升至103.4kPa（121.3℃）时，维持此压力与温度30分钟（对于难杀灭的芽孢杆菌，可适当延长时间）。灭菌结束后，关闭热源，缓慢放气至压力归零，打开锅盖，取出物品，置于烘箱中烘干或自然晾干。

三、移液器的使用与校准

移液器（又称移液枪）是精确量取微量液体的核心工具，广泛应用于各种实验操作中，其操作的规范性直接影响液体移取的准确性。

（一）移液器的选择与量程设定

根据实验所需移取液体的体积，选择合适量程的移液器。通常，移液器的最佳移液体积为其量程的35%-100%之间，以保证精度。设定量程时，应一手握住移液器上部，另一手旋转量程调节旋钮。注意，不得将量程调至超过其最大量程或低于最小量程，以免损坏内部精密部件。当从大体积调至小体积时，可直接旋转旋钮至目标刻度；若从小体积调至大体积，建议先调至超过目标刻度约1/3圈，再回调至目标刻度，以消除机械间隙带来的误差。

（二）吸头的安装

选择与移液器型号匹配的吸头。将移液器的吸头连接端垂直插入吸头中，轻轻用力下压并小幅旋转，确保吸头与移液器紧密结合，无漏气。避免用力过猛导致移液器部件损坏或吸头变形。

（三）液体的移取

移取液体时，保持移液器垂直。用拇指缓慢按下移液器的按钮至第一停点（吸液点），将吸头尖端垂直浸入液面以下2-3毫米处（注意不要太深，以免吸头外壁沾取过多液体；也不要太浅，防止吸空）。然后，缓慢松开拇指，使按钮自然回弹，将液体吸入吸头内。吸入过程中避免过快松开拇指，以防液体冲入移液器内部造成污染或损坏。

吸头吸满液体后，应将吸头尖端沿容器内壁轻轻滑出，并在容器