基于Box-Behnken响应面法的烤后烟叶品种分子鉴定技术构建.pdfVIP

中国烟草科学ChineseTobaccoScience2025,46(3):1-11DOI:10.13496/j.issn.1007-5119.2025.03.001

基于Box-Behnken响应面法的烤后烟叶品种分子鉴定技术构建

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田震，李媛，毛静静，任民，熊党安，张兴伟，殷瑜东，李少鹏，刘国祥

（1.江苏中烟工业有限责任公司，南京210019；2.中国农业科学院烟草研究所，青岛266101）

摘要：为解决烤后烟叶DNA降解严重、难以满足后续分子鉴定要求的问题，综合考虑分子标记所需DNA的浓度、质量

以及提取效率、成本和安全等因素，本文基于SLS法，以加样量、离心时间、水浴时间为处理，以DNA浓度和A260/A280

为响应值，采用单因素试验及Box-Behnken响应面模型确定烤后烟叶基因组DNA的最佳提取方法。结果表明，烤后烟叶基

因组DNA提取的最佳条件为加样量20mg、离心时间10min、水浴时间15min，按照该方法提取的DNA浓度为

588.16±27.09ng/µL、A260/A280为1.75±0.03，与DesignExpert11软件预测结果相近，优化方法可靠。分子标记适用性检测

结果表明，与优化前相比，以优化后SLS方法提取的DNA为模板，分别利用SSR、KASP引物进行PCR扩增后，毛细管

电泳的目标片段出峰更明显，且KASP标记检测可得到明显的分型图，可用于不同品种烤后烟叶的SSR和KASP分子标记

检测。优化后的SLS法及筛选出的13对SSR引物构建的烤后烟叶分子鉴定技术体系，可将供试的烤后烟叶品种进行有效

区分，适用于烤后烟叶的品种鉴定。

关键词：烤后烟叶；基因组DNA提取方法；响应面分析法；SSR；KASP；分子鉴定技术

中图分类号：S572.03文献标识码：A文章编号：1007-5119（2025）03-0001-11

ConstructionofMolecularIdentificationTechnologyforCuredTobacco

VarietiesBasedonBox-BehnkenResponseSurfaceMethod

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TIANZhen,LIYuan,MAOJingjing,RENMin,XIONGDang’an,ZHANGXingwei,

112*

YINYudong,LIShaopeng,LIUGuoxiang

(1.ChinaTobaccoJiangsuIndustrialCo.,Ltd.,Nanjing210019,China;2.InstituteofTobaccoResearch,

ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Qingdao266101,China)

Abstract:ToaddressthesevereDNAdegradationincuredtobaccoleaves,whichhinderssubsequentmolecularidentification

experi