实验一--显微镜的使用及细菌的观察.pptVIP

实验室规则

•接触到病原菌，一定要坚持无菌操作

•进实验室穿上白大衣，离开时反折

•严禁饮食，也不要以手抚摸头、面等部位

•若发生吸入菌液，割破手指等事故，必须报

告老师

•接触过菌液的吸管、玻片等器材，投入含有

2~3%来苏儿的容器内

•实验完毕，整理桌面

微生物实验要求

•做实验后要认真完成实验报告，所得

结果必须真实记录

浙江大学实验报告

•课程名称：实验类型：

•实验项目名称：

•学生姓名：专业：学号：

•同组学生姓名：指导老师：

•实验地点：实验日期：年月日

•实验目的和要求（必填）

•实验内容和原理（必填）

•主要仪器设备

•操作方法与实验步骤

•实验数据记录和处理

•实验结果与分析（必填）

•讨论、心得

实验一

显微镜的使用及细菌的观察

实验内容

•操作：

–油镜的使用

–细菌材料玻片标本制备

–革兰染色法（GramStain）

•示教

–细菌的基本形态

•链球菌

•螺形菌---弧菌（霍乱弧菌）

–细菌的特殊结构

•鞭毛（变形杆菌）

•荚膜（肺炎链球菌）

•芽胞（破伤风梭菌）

实验目的

•掌握油镜的使用和保护

•熟悉细菌的基本形态和特殊结构的镜下特点

•掌握无菌操作

•掌握革兰染色法

显微镜的使用和保护---原理

•油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间不

是隔一层空气，而是隔一层油质称为油浸系。

这种油常选用香柏油

•如果玻片与物镜之间的介质为空气，称为干燥

系，当光线通过载玻片后，受折射发生散射现

象，进入物镜的光线显然减少，这就降低了视

野的照明度

•香柏油的折射率n＝1.515，与玻璃n＝1.52相

近。当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油

进入物镜而不发生折射

油浸没物镜介质：空气；香柏油

细菌材料玻片标本制备

•涂片------干燥------固定

•涂片：先取一接种环生理盐水放于载玻片的一端，

左手持菌液试管，右手持接种环，用接种环从试

管培养液中挑取少许大肠杆菌或葡萄球菌培养物

与盐水混匀，涂成直径约1厘米的涂片，涂片应薄

而均匀。

•干燥：涂片最好放置室温中，待其自然干燥。

•固定：手执玻片的一端标本面向上，在火焰外层

较快地来回通过三次，约2~3秒，以玻片反面触

及皮肤，以不觉过分地烫为度。待放置冷却后，

进行染色。

•掌握无菌操作

–拔或塞试管帽时，应将试管口通过火焰略加烧灼；

–接种环使用前后应在火焰上烧灼灭菌

固定的目的

①杀死微生物，固定其细胞结构

②保证菌体能牢固地粘附在载玻片上，以免

水洗时被水冲掉

③改变菌体对染料的通透性，一般死细胞原

生质容易着色。

革兰染色法

•由丹麦C.Gram于1884年创立，是细菌学中很重要

的鉴别染色法，通过此法染色，可将细菌鉴别为革

兰阳性菌（G+）和革兰阴性菌（G-）两大类

•细菌细胞壁的结构

革兰染色法－－原理

•G＋菌胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，

乙醇不易透入。同时乙醇使细胞壁脱水形成一道

屏障，阻止结晶紫—碘复合物从胞内渗出，故细

菌仍保留初染时的紫色。

•G－菌胞壁结构较为疏松，肽聚糖层很薄，外膜

含大量脂质，易被乙醇溶解，致使细胞壁通透性

变大，使结晶紫--碘复合物被乙醇溶解析出而脱色，

故细菌呈复染时的红色

革兰染色方法

•初染：滴加结晶紫染液,染1分钟,水洗.

•媒染：滴加卢戈氏碘液,作用1分钟后,水洗.

•脱色：加95%酒精2~3滴于涂片上,频频摇

晃3~5秒钟后,斜持玻片,使酒精流去;再滴加

酒精,如此反复2~3次