Transwell实验技术及其在细胞研究中应用.pdfVIP

Transwell实验方法

概念

这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是细胞侵袭模型。

1.Transwell

关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解

吧，trans-这个词根有转移、、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，

这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明介绍，可以

认为这是一种膜滤器（Membranefilters），也可认为是一种有通透性的支架（permeab

lesupports）。

更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Tr

answellchamber，Transwellinsert），其外形为一个可放置在里的小，不同厂

家对Transwell会有不同名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，

可有不同选择。

但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是底层的一张有通透性的膜，而

其余部分的材料与普通的是一样。这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据

不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonatemembrane，PC）。

PC膜半透明，不太方便在培养的过程中观察上室细胞的形态；PET膜透明，方便在相差显

微镜下观察细胞的状态

下图是一个Transwell装置的纵切面

将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室

内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。

细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内

的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、等的影响。

应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细

胞侵袭等多种方面的研究。

下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞

其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验：

（1）共培养体系：

小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞能力，不需要

细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。常用0.4、3.0µm。我们用的是

0.4µm。

将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的

影响。

（2）趋化性实验

可用5.0、8.0、12.0µm膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量

可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。

①细胞B对细胞A的趋化作用：将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分

泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。

②趋化因子对细胞的趋化作用：将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因

子对细胞的趋化作用。

（3）细胞迁移实验

常用8.0、12.0µm膜，上室种细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，细胞

会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映细胞的迁移能力。

（4）细胞侵袭实验

常用8.0、12.0µm膜，原理与细胞迁移实验类似。

上室种细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，细胞会向营养成分高的下室

跑，但与细胞迁移实验不同的是，聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶，用以模仿体内细

胞外基质，细胞欲进入下室，先要分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，方可通过

聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映细胞的侵袭能