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标题6：生物高考基因工程问答题总结

基因工程（又称基因拼接技术或DNA重组技术）是高考生物的核心考点之一，常以问答题（包括简答题、分析题）形式出现，分值占比10-15分。本总结紧扣高考考纲，梳理基因工程核心知识点、高频问答考点、答题模板及易错点，结合经典真题设问角度，助力考生规范答题、精准得分。

基因工程核心概念与工具（基础问答考点）

基因工程的基本原理与核心步骤（必考题）

设问角度：简述基因工程的基本原理及核心操作步骤。

标准答题思路：

基本原理：基因重组（不同生物的基因在体外拼接后，导入受体细胞内进行表达，实现基因的定向转移和改造）。

核心步骤（4步）：

①目的基因的获取：从基因文库中获取、PCR技术扩增、人工合成（如化学合成法，适用于已知核苷酸序列的短基因）；

②基因表达载体的构建（核心步骤）：将目的基因与载体（如质粒、噬菌体、动植物病毒）结合，形成重组DNA分子；

③将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞类型选择方法（植物：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法；动物：显微注射法；微生物：感受态细胞法，如Ca2?处理大肠杆菌）；

④目的基因的检测与鉴定：分子水平检测（DNA分子杂交、分子杂交、抗原-抗体杂交）和个体水平鉴定（如抗虫、抗病接种实验）。

易错点警示：易混淆“基因表达载体的构建”与“目的基因导入受体细胞”的核心地位，需明确前者是基因工程成功的关键（需使目的基因能稳定存在、复制、表达和发挥作用）。

基因工程的工具酶与载体（高频问答考点）

设问角度1：基因工程中常用的工具酶有哪些？各自的作用特点是什么？

标准答题思路：

限制酶（限制性核酸内切酶）：

来源：主要从原核生物中分离纯化而来；

作用：识别特定的核苷酸序列（回文序列，如EcoRⅠ识别GAATTC），并在特定的切点切割DNA分子，产生黏性末端或平末端；

特点：特异性（识别序列特定、切割位点特定）。

DNA连接酶：

作用：将两个DNA片段的黏性末端或平末端连接起来，形成磷酸二酯键（连接骨架，而非碱基对之间的氢键）；

分类：E·coliDNA连接酶（只能连接黏性末端）、T?DNA连接酶（可连接黏性末端和平末端）。

易错点警示：易与DNA聚合酶混淆，需明确：DNA连接酶连接“两段DNA片段”，无需模板；DNA聚合酶连接“脱氧核苷酸”形成DNA链，需模板（如PCR扩增中使用）。

设问角度2：作为基因工程的载体，需具备哪些条件？常用载体有哪些？

标准答题思路：

载体必备条件（4点）：

①能在受体细胞内稳定存在并自我复制（保证目的基因稳定遗传）；

②具有一个或多个限制酶切割位点（便于插入目的基因）；

③具有标记基因（如抗生素抗性基因、荧光基因，便于筛选含有目的基因的受体细胞）；

④对受体细胞无害（不会影响受体细胞的正常生命活动）。

常用载体：质粒（最常用，小型环状双链DNA分子，存在于大肠杆菌等细菌中）、λ噬菌体衍生物、动植物病毒（如农杆菌的Ti质粒可作为植物基因工程的载体）。

目的基因的获取与表达载体构建（高频问答考点）

目的基因的获取方法（细节问答考点）

设问角度：获取目的基因的常用方法有哪些？简述PCR技术的原理、条件及过程。

标准答题思路：

常用方法：①从基因文库中获取（基因组文库、部分基因文库如cDNA文库）；②PCR技术扩增；③人工合成（化学合成法、反转录法）。

PCR技术（多聚酶链式反应）：

①原理：DNA半保留复制（模拟体内DNA复制过程，在体外快速扩增目的基因）；

②条件：模板DNA（含目的基因）、引物（一对，分别结合目的基因两端）、Taq酶（热稳定DNA聚合酶，耐高温）、dNTP（脱氧核苷三磷酸，原料）、缓冲液；

③过程（3步循环，重复30-40次）：

变性（90-95℃）：DNA双链解旋为单链；

复性（55-60℃）：引物与模板DNA单链的互补序列结合；

延伸（70-75℃）：Taq酶催化dNTP结合到引物末端，合成子链（延伸方向5’→3’）。

④特点：快速扩增目的基因，使目的基因数量呈指数级增长（2?，n为循环次数）。

易错点警示：PCR技术中无需解旋酶（高温变性即可使DNA解旋）；引物是短单链DNA或RNA，需与目的基因两端的序列互补。

基因表达载体的构建（核心问答考点）

设问角度：基因表达载体的组成成分有哪些？各成分的作用是什么？构建过程中需注意哪些问题？

标准答题思路：

组成成分及作用（5部分）：

①目的基因：需表达的基因（如抗虫基因、药用蛋白基因）；

②启动子：位于目的基因上游，是RNA聚合酶结合的位点，驱动目的基因转录；

③终止子：位于目的基因下游，使RNA聚合酶停止转录；

④标记基