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单克隆抗体制备技术2008年11月6日

杂交瘤技术的基本原理

杂交瘤技术的基本原理1：HAT选择培养基：次黄嘌呤(hypoxanthine,H)氨基蝶呤(aminopterin,A)胸腺嘧啶核苷(thymidine,T).2：细胞的DNA合成一般有两条途径：A：由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，叶酸作为重要的辅酶参与反应。B：在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在下，经次黄嘌呤磷酸核糖转化酶(HGPRT)或胸腺嘧啶核苷激酶(TK)的催化下合成DNA。

杂交瘤技术的基本原理HAT培养基的选择原理：A：氨基蝶呤(A)是叶酸拮抗剂，可阻断细胞利用正常途径合成DNA，细胞在含有氨基蝶呤的培养基中不能通过正常途径合成DNA。B：瘤细胞是HGPRT酶阴性细胞，自身不能通过替代途径合成DNA而繁殖。C：B细胞虽含有HGPRT，但不能在体外培养存活（只存活5~7d，且功能下降)。D：融合细胞含有B细胞和瘤细胞，其中瘤细胞核利用B细胞的HGPRT酶进行旁路合成DNA而存活。

免疫程序与检测方法的建立免疫程序建立检测方法检测免疫效果

免疫程序取6-8周龄Balb／C雌鼠，首免，每只鼠用0.5mL含50μg的重组蛋白与10%体积的ISA15AVG佐剂混匀，颈背部皮下多点注射；间隔3w进行二免，免疫原、剂量