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网织红细胞检测进展及其临床应用

概述网织红细胞(reticulocyte，Ret)是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞，略大于成熟红细胞。网织红细胞是有核红细胞刚刚失去核的阶段，仍属未完全成熟的红细胞，浆内尚残留有嗜碱性RNA，经碱性染料（如天青B、煌焦油蓝或新亚甲蓝）活体染色后，在包体内可见蓝色点状或网状结构，故名网织红细胞。

概述红细胞在骨髓中生成，至发育为成熟红细胞，经历了不同阶段：干细胞、原始红细胞、早幼红细胞、中幼红细胞、晚幼红细胞、网织红细胞，最后发育为成熟红细胞。随着细胞的成熟，RNA含量逐渐减低，至细胞完全成熟后消失或接近消失，即红细胞中网线状结构越多，表示细胞越幼稚。ICSH（国际血液学标准委员会）将Ret分为4型：Ⅰ型（丝球型）、Ⅱ型（花冠型或网型）、Ⅲ型（破网型）、Ⅳ型（颗粒型）。正常生理状态下，Ⅰ型只存在于骨髓，Ⅱ型在外周血也很难见到，Ⅲ型仅有少量释放到外周血，因此外周血网织红细胞计数时以Ⅳ型为主。

网织红细胞分型ICSH将网织红细胞分类四型：IRF（未成熟网织红细胞比例）=HFR+MFRI型（丝球型）：红细胞几乎被网织物充满，此型亦仅见于正常骨髓中。II型（网型）：位于红细胞中央线团样结构，开始松散、此型大量存在于骨髓中。Ⅲ型（破网型）：网织结构稀小，呈不规律枝点状排列，外周血中可见少量。IV型（颗粒型）：胞浆中嗜碱物质很少，呈分散的细颗粒、短丝状，正常外周血中的网织细胞大多见于此型。ⅠⅡⅢⅣHFRMFRLFR

网织红细胞检测进展1.手工法2.血细胞分析仪法3.流式细胞仪法和专用网织红细胞分析仪

1.手工法手工法分玻片法和试管法。由于玻片法容易使混合血液中的水分蒸发，染色时间偏短，因此结果偏低；试管法容易掌握，重复性较好，必要时还可以从混合血液中再取标本重新涂片复查。试管法被列为手工法Ret计数的参考方法。按卫生部《全国临床检验操作规程》第2版，采用试管法用煌焦油蓝染液对血液标本进行红细胞活体染色、制片，选择细胞分布较均匀、厚薄适中的体尾交界处，每份标本油镜下，Ret6%，计数红细胞1000个；3%～5%计数红细胞2000个；1%～2%应计数红细胞4000个；小于1%计数红细胞10000个。

网织细胞的活体染色:ⅰ染色时间:2~8minⅱ比例:用2%的煌焦油兰染色以滴数计1:5时,网织细胞数开始减少,1:2为最佳.ⅲ涂片部位:中部为佳.ⅳ玻片干燥程度:立即干燥者最佳.?普通光学显微镜法:计数1000个RBC中的Ret,以百分数表示.

传统的显微镜计数方法操作较繁琐、影响结果的因素较多。近年来，国内开始使用国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的Miller窥盘进行计数，规范了计算区域，减少了实验误差，使结果准确性有所提高(卫生部临检中心建议，CV控制在15%之内)。Miller窥盘法是将一种光学圆片状Miller窥盘安放在显微镜目镜中，窥盘中有面积比例为1：9的2个正方形计数方格，只需计数1／9小方格内的红细胞即可准确估量出整个大方格内的红细胞数量

计算方法

1.Miller窥盘法：网织红细胞（Retic）百分率(%)=（大方格内Retic总数）/（小方格内RBC总数×9）×100%2.直接计数法：网织红细胞（Retic）百分率(%)=多个视野内Retic总数/多个视野内RBC总数×100%

卫生部临床检验中心控制Ret计数CV≤15%需镜检的RBC数目Ret(%)计数Miller窥盘小方格RBC相当于缩视野法计数RBC数目1-244440003-5222200061111000

手工法网织红细胞活体染色染料评价染料评价新亚甲蓝WHO推荐使用，对RNA着色强，试剂稳定，Hb几乎不着色煌焦油蓝溶解度低，染料沉渣易附着红细胞表面，影响辨认；易受变性珠蛋白小体、HbH包涵体干扰中性红染液浓度低、背景清晰、网织颗粒与红细胞对比鲜明；不受变性珠蛋白小体、HbH包涵体干扰

参考值

成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%）新生儿：0.02-0.06（2%-6%）儿童：0.005-0.075（0.5%-7.5%）成人绝对值（24-84）?109/L

2.血细胞分析仪法虽然仪器法Ret计数有诸多优点，而且精密度明显优于手工法，但也存在一些不足：第一，所有仪器分析的基本原理都是检测Ret内RNA的存在量来决定其百分率和绝对值，当某些患者血液中有核细胞或淋巴细胞异常增加时，可导致Ret计数结果的假性增加；第二，冷凝集素存在、红细胞的聚集、某些病理因素或药物都能使红细胞产生自身荧光；第三，自动化分析仪结果的准确性除了依赖于仪器本