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细菌形态学检查

细菌的显微镜检查显微镜：光学显微镜所用放大倍数：10×100＝1000所用镜头：油镜头镜油：香柏油或石蜡油香柏油折光率（n＝1.515）与玻片折光率（n＝1.52）接近显微镜使用完毕须擦拭镜头。

不染色标本检查应用：主要用于观察活菌的动力和运动方式常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野映光法

压滴法载玻片细菌悬液盖玻片

悬滴法镜检

染色标本的检查染色方法的种类单染法:采用一种染料染色复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别细菌。

染色标本检查的基本程序涂片－→干燥－→固定－→染色★涂片方式★干燥的方法★固定的方法、目的★染料种类：碱性染料、酸性染料、中性染料，碱性染料最常用

革兰染色结果紫色－－革兰阳性菌红色－－革兰阴性菌

染色结果图革兰阳性菌革兰阴性菌

染色原理★渗透学说：与肽聚糖结构有关★化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关★等电点学说：与细菌所带电荷有关

革兰染色意义★有助于鉴别细菌★有助于选择用药★有助于了解细菌的致病性

影响革兰染色的因素操作因素★涂片的厚薄★脱色时间的长短染液因素★卢戈碘液放置时间过长★95％乙醇挥发★结晶紫与草酸铵混合时间太长细菌因素：★细菌种类、★细菌菌龄

抗酸染色用于区别抗酸菌与非抗酸菌

细菌特殊染色

负染色法

细菌的培养与分离技术

培养基常用玻璃器材的准备培养基的成分和作用培养基的种类培养基的制备

常用玻璃器材的准备玻璃器材的种类及用途玻璃器材的清洗★新购置的玻璃器材：1％～2％盐酸浸泡－→清水清洗★用过的无污染器皿：洗涤剂洗刷－→清水清洗细菌污染的器材：消毒灭菌后再洗刷★盛培养基试管和平皿：高压灭菌－→趁热倒出－→洗涤剂洗刷－→清水冲洗★吸管：3％来苏浸泡－→清水冲洗★玻片和盖玻片：3％来苏和清洁液浸泡－→清水冲洗；染色后的玻片，应肥皂水煮沸10min再洗涤★含油脂的器皿：单独灭菌

玻璃器皿灭菌前的准备玻璃器皿在清洗、干燥后必须经正确的包裹和加塞后才能进行灭菌处理。

培养基的成分和作用培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类水凝固剂：琼脂、明胶抑制剂指示剂

培养基的种类（按用途分类）基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA）选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如SS平板增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。厌氧培养基：用于培养厌氧菌

培养基的种类（按物理性状分类）液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。半固体培养基：含0.3％～0.5％琼脂，用于观察细菌的动力。固体培养基：含2％～2.5％琼脂，多用于细菌的分离培养。

培养基制备的一般程序调配溶化矫正pH过滤澄清分装灭菌检定培养基灭菌★基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟★含糖培养基：113℃灭菌15分钟★鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次★不耐高温的液体成分：滤过除菌保存

培养基pH测定及矫正材料：待测培养基、pH7.4标准比色管、4孔比色架、0.02％酚红、氢氧化钠0.1mol/L、1mol/L）盐酸（0.1mol/L、1mol/L）蒸馏水试管（与比色管口径一致）、刻度吸管（5ml、1ml、0.5ml、0.25ml）、

pH矫正水培养基培养基比色管酚红指示剂目视

培养基蒸馏水pH矫正过酸相同过碱标准比色管待测管培养基蒸馏水标准比色管待测管培养基蒸馏水标准比色管待测管

计算假设2ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol/LNaOH0.12ml，现有培养基1000ml，求需加NaOH的量。2：1000＝0.12：X设需加NaOH的量为Xml。X=0.12×10002＝60ml0.1mol/LNaOH60÷10＝6ml1mol/LNaOH

细菌的接种与培养无菌技术细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌标本的采集无菌试管、烧瓶的使用

细菌接种的基本程序灭菌接种环沾取标本接种灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境

细菌接种法平板划线接种法：★目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。★方法：★分区划线法：适用于含菌量较多的标本★连续划线法：适用于含菌量较少的标本液体培养基接种法穿刺接种法:用于观察细菌动力斜面接种法倾注培养法:用于细