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泰斯特TST-GL03微生物限度测试仪标准操作规程

1范围

本规程规定了泰斯特TST-GL03微生物限度测试仪（以下简称“测试仪”）的操作流程、设备维护、校准核查、安全注意事项及异常处理等要求。

本规程适用于泰斯特TST-GL03型号微生物限度测试仪的日常操作、维护及管理，涉及制药、食品、化工等领域非无菌产品微生物限度检查中的微生物计数检测场景，操作人员需经专业培训并考核合格后，方可按照本规程执行操作。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本规程的引用而成为本规程的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规程，然而，鼓励根据本规程达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规程。

《中华人民共和国药典》（最新版）四部1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法

《泰斯特TST-GL03微生物限度测试仪使用说明书》

《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）

3设备概述与工作原理

3.1设备概述

泰斯特TST-GL03微生物限度测试仪是一款用于微生物限度检查的专用设备，采用薄膜过滤法原理，可实现供试品中微生物的截留与富集，配套相应培养基培养后完成微生物计数。设备主要由主机、过滤杯、过滤膜、真空系统、控制系统等部分组成，具备操作简便、过滤效率高、密封性好等特点，适用于受控洁净环境下的微生物检测工作。

3.2工作原理

通过真空系统产生负压，使供试品溶液通过特定孔径的过滤膜，将溶液中的微生物截留于过滤膜表面，去除供试品中的抑菌成分后，在过滤膜上覆盖适宜的培养基，经规定条件培养后，对膜上生长的微生物菌落进行计数，从而确定供试品的微生物限度。

4操作前准备

4.1环境要求

试验需在受控洁净环境下的局部洁净度不低于B级的单向流空气区域内进行。操作前需确认环境温度为18℃-26℃，相对湿度为45%-65%，环境监测结果符合相关规定；同时检查工作台面及环境清洁状况，确保无粉尘、污渍等污染。

4.2设备检查

外观检查：查看测试仪主机、过滤杯、管路等部件是否完好，有无破损、变形、渗漏等情况；控制面板按键、显示屏是否正常，无乱码、失灵现象。

真空系统检查：连接好真空管路，确保管路连接牢固、密封良好；启动真空系统，检查真空度是否稳定，无漏气现象，真空表显示正常。

耗材准备：根据试验需求选择适宜孔径的过滤膜（一般微生物计数选用0.45μm孔径），确认过滤膜无破损、过期；准备无菌过滤杯、无菌镊子、移液管等耗材，所有耗材均需经灭菌处理并在有效期内使用。

4.3试剂与供试品准备

试剂准备：配制符合药典要求的稀释液（如pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液）、中和剂（如需去除供试品抗菌活性）及培养基（如胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基），培养基需经适用性检查合格。

供试品准备：按照《中华人民共和国药典》相关规定制备供试液，确保供试液制备过程严格遵守无菌操作，防止再污染；若供试品有抗菌活性，需提前采用适宜方法去除或中和，并确认中和剂有效性及对微生物无毒性。

4.4人员准备

操作人员需穿戴洁净的工作服、工作帽、口罩、手套等防护用品，经手部消毒后进入操作区域；操作前需熟悉本规程及设备使用说明书，明确试验目的及操作步骤。

5操作步骤

5.1设备开机与参数设置

打开测试仪电源开关，待设备自检完成后，根据试验需求设置参数，包括真空度、过滤时间等。一般情况下，真空度设置为0.04MPa-0.06MPa，过滤时间根据供试品溶液体积及黏度调整，确保过滤顺畅且无微生物损伤。

5.2过滤系统安装

采用无菌操作方法，用无菌镊子夹取一张无菌过滤膜，平铺于过滤杯的滤膜支架上，确保滤膜无褶皱、无偏移；将过滤杯平稳安装在主机上，顺时针旋转拧紧，保证密封良好，防止漏液。

5.3供试品过滤

用无菌移液管吸取规定体积的供试液，缓慢加入过滤杯中，避免供试液飞溅；启动真空系统，开始过滤，过滤过程中观察溶液过滤速度，若出现过滤缓慢或堵塞情况，可适当调整真空度，严禁强行增大负压导致滤膜破损。

供试液过滤完成后，加入适量无菌稀释液冲洗过滤膜2-3次，以去除供试品残留的抑菌成分，冲洗液需缓慢加入，避免冲击滤膜上的截留微生物。

5.4滤膜转移与培养

关闭真空系统，逆时针旋转取下过滤杯，用无菌镊子小心夹取过滤膜，菌面朝上平铺于已制备好的培养基平板上，轻轻按压滤膜，确保滤膜与培养基紧密贴合，无气泡残留；根据微生物类型选择培养条件：需氧菌总数计数培养温度为30℃-35℃，培养时间不超过3天；霉菌和酵母菌总数计数培养温度为20℃-25℃，培养时间不超过5天。

5.5阴性对照试验

每次试验需同时进行阴性对照试验，取与供试品处理相同体积的无菌稀释液，