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生物指示剂无菌检查规程

1总则

1.1目的与依据

为规范生物指示剂无菌检查的操作行为，保障检查结果的准确、可靠，确保生物指示剂质量符合相关标准要求，进而保障灭菌工艺验证及微生物检测工作的有效性，依据《中华人民共和国药品管理法》《2025年版中国药典》《无菌医疗器具生产管理规范》（YY0033-2000）等相关法律法规及国家标准，制定本规程。

本规程适用于各类生物指示剂（如湿热灭菌生物指示剂、干热灭菌生物指示剂、环氧乙烷灭菌生物指示剂等）的无菌性能检查，覆盖药品生产企业、医疗器械生产企业、食品检测机构、第三方检测实验室等开展生物指示剂无菌检查的主体及从业人员。

1.2基本原则

1无菌操作原则：检查全过程需严格遵循无菌操作要求，所有操作均应在符合规定的无菌环境中进行，防止环境微生物、操作人员及器具对样品造成污染，确保检查结果真实可靠。

2规范性原则：检查操作应严格按照本规程及相关专项技术标准执行，明确各环节操作要求、技术参数及判定标准，确保检查过程可追溯、可复现。

3时效性原则：生物指示剂具有特定的有效期和储存条件，检查样品应在有效期内取用，且采集后需及时进行检查，避免因放置时间过长或储存不当导致微生物状态改变，影响检查结果。

4质量控制原则：检查过程中应设置完善的阳性对照、阴性对照及空白对照，通过对照试验验证检查方法的有效性和环境、试剂的无菌性，及时发现并排除系统误差。

5安全性原则：作业人员应做好个人防护，规范操作生物指示剂及相关化学试剂、设备，防范微生物感染、化学灼伤等安全风险；妥善处理含菌废弃物，避免造成环境污染。

1.3适用范围

本规程规定了生物指示剂无菌检查的术语定义、检查准备、操作流程、结果判定、质量控制、安全管理及档案管理等内容。

凡开展各类生物指示剂无菌检查的活动，均应遵守本规程。若涉及特殊类型生物指示剂或特殊检测场景的无菌检查，除遵守本规程外，还应符合相关专项技术标准和管理规定。

1.4引用标准

下列标准的相关内容通过引用成为本规程的组成部分。凡是注日期的引用标准，仅注日期的版本适用于本规程；凡是不注日期的引用标准，其最新版本（包括所有修改单）适用于本规程。

《中华人民共和国药品管理法》

《2025年版中国药典》（四部）

《无菌医疗器具生产管理规范》（YY0033-2000）

《生物指示剂第1部分：通则》（ISO11138-1）

《灭菌生物指示物第2部分：湿热灭菌用生物指示物》（ISO11138-2）

2术语与定义

2.1核心术语

1生物指示剂：指对特定灭菌工艺具有确定的抗力，用于验证灭菌工艺有效性的活微生物制品，通常由规定数量的特定微生物菌株接种于合适的载体上制成。

2无菌检查：指检查非无菌产品、无菌产品的无菌性能或验证灭菌工艺有效性时，通过培养等方法确认样品中是否存在活微生物的检测过程。

3无菌环境：指符合无菌要求的操作环境，如生物安全柜、超净工作台、无菌室等，其洁净度、微生物污染水平需满足相关标准规定。

4阳性对照：指在检查过程中设置的、接种了已知阳性菌株的对照试验，用于验证检查方法的敏感性和有效性，确认培养条件适合微生物生长。

5阴性对照：指在检查过程中设置的、未接种任何微生物或接种了无菌稀释液的对照试验，用于监测检查过程中是否存在环境、试剂或器具污染。

6空白对照：指在与检查相同的环境条件下，仅使用相同的试剂和器具进行同步处理，未加入生物指示剂样品的对照试验，用于进一步排查污染来源。

7复苏培养：指将生物指示剂样品接种于适宜的培养基后，在规定的温度、时间条件下进行培养，使可能存在的活微生物恢复生长繁殖的过程。

3检查准备

3.1人员准备

1资质要求：作业人员应具备微生物检测相关专业知识和技能，经岗前培训考核合格后上岗；熟悉本规程及相关专项技术标准，掌握无菌操作技巧、生物指示剂特性及相关设备的正确使用方法。

2个人防护：作业人员进入无菌操作区域前，应按规定穿戴无菌服、无菌手套、无菌口罩、无菌帽等个人防护用品，确保衣物整洁、无破损，避免身体直接接触样品及操作台面。

3.2场地与环境准备

1场地划分：应设置专用的微生物检测区域，明确划分样品接收区、样品前处理区、无菌操作区、培养区、废弃物处理区等功能区域，分区标识清晰，避免交叉污染。

2无菌环境验证：无菌操作必须在生物安全柜或超净工作台内进行，操作前需对无菌环境进行清洁消毒（如紫外照射消毒30分钟以上）；定期对无菌环境进行洁净度验证（如沉降菌检测、高效过滤器完整性测试），确保其符合相关标准要求。

3环境参数控制：培养区及无菌操作区的温度、湿度需严格控制，温度波动应符合培养要求（如细菌培养环境温度通常为36±1℃）；每日记录环境温湿度数据，确保参数稳定。

3.3设备与器具准备

1设备选型与检