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基于无机纳米材料构建电流型甲胎蛋白免疫传感器的研究

摘要

本研究致力于开发基于无机纳米材料的电流型甲胎蛋白（AFP）免疫传感器。通过将磁性微球作为一抗固定载体，CdTe量子点作为二抗标记物，并利用碳二亚胺交联法制备免疫磁珠和量子点标记抗体，成功构建了新型夹心型电化学免疫传感器。该传感器结合夹心免疫分析模式与电化学溶出伏安法，展现出对AFP抗原检测的宽线性范围（1-200ng/mL）以及低检测限（0.025ng/mL）。同时，该传感器具备仪器简单、操作便捷、检测结果稳定等优势，为AFP的检测提供了一种高效且可靠的手段，在临床诊断等领域具有潜在的应用价值。

关键词

无机纳米材料；电流型免疫传感器；甲胎蛋白；电化学溶出伏安法

一、引言

甲胎蛋白（AFP）作为一种重要的肿瘤标志物，在肝癌等疾病的早期诊断中具有关键意义。正常人血清中AFP的含量通常较低，一般不高于20μg/L，然而当肝细胞发生癌变时，其在血清中的含量会急剧上升。因此，发展一种简便、快速、高灵敏的检测AFP的方法对于肝癌的早期诊断和鉴别至关重要。

传统的AFP检测方法，如酶联免疫分析和荧光免疫分析，虽然具有一定的准确性，但存在成本较高、试剂盒保存困难等问题。放射性免疫分析则存在重现性较差的弊端。相比之下，电化学免疫传感器凭借其设备简单、操作简便、灵敏度高、选择性好、抗干扰能力强以及成本低等显著优点，逐渐成为生物传感领域的研究热点。

无机纳米材料，如磁性纳米粒子、量子点、纳米金等，因其独特的物理化学性质，在生物传感器的构建中展现出巨大的潜力。这些纳米材料能够增大传感器的比表面积，提高电子传递效率，增强生物分子的固定量，从而有效提升传感器的性能。基于此，本研究旨在利用无机纳米材料构建电流型AFP免疫传感器，以实现对AFP的高灵敏检测。

二、实验部分

2.1仪器与试剂

实验中使用了电化学工作站，用于电化学测试。透射电子显微镜（TEM）用于对纳米材料的微观结构进行表征。离心机用于样品的分离和纯化。恒温振荡器用于孵育反应。

试剂方面，包括甲胎蛋白（AFP）抗原、AFP一抗和二抗、磁性微球、CdTe量子点、碳二亚胺、牛血清白蛋白（BSA）、磷酸盐缓冲溶液（PBS）、氯金酸（HAuCl?）等。所有试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。

2.2磁性微球的修饰

首先，对磁性微球进行表面活化处理。将一定量的磁性微球分散在适量的缓冲溶液中，加入碳二亚胺，在一定温度下搅拌反应一段时间，使磁性微球表面引入活性基团。然后，将AFP一抗加入到上述溶液中，继续搅拌孵育，使一抗通过共价键结合到磁性微球表面，制备得到AFP一抗固化的免疫磁珠。反应结束后，利用外加磁场对免疫磁珠进行分离，并用缓冲溶液多次洗涤，去除未结合的一抗。

2.3CdTe量子点的修饰

通过化学合成法制备CdTe量子点，并对其进行表面修饰。将合成的CdTe量子点分散在缓冲溶液中，加入碳二亚胺，搅拌反应使量子点表面活化。随后加入AFP二抗，在适宜条件下孵育，使二抗与量子点表面的活性基团结合，得到AFP二抗固化的CdTe量子点。同样，利用离心等方法对修饰后的量子点进行分离和洗涤，以去除杂质。

2.4免疫传感器的制备

将修饰后的免疫磁珠分散在缓冲溶液中，取适量滴涂在玻碳电极表面，在一定条件下干燥，使免疫磁珠固定在电极表面。然后，将含有AFP二抗固化的CdTe量子点的溶液滴涂在已固定免疫磁珠的电极表面，再次干燥，从而构建成电流型AFP免疫传感器。为了封闭电极表面的非特异性吸附位点，最后将牛血清白蛋白（BSA）溶液滴涂在电极表面进行封闭处理。

2.5检测方法

采用电化学溶出伏安法对AFP抗原进行检测。将制备好的免疫传感器置于含有不同浓度AFP抗原的PBS缓冲溶液中，在一定温度下孵育一段时间，使抗原与免疫传感器表面的抗体发生特异性结合。然后，将免疫传感器转移至含有适量电解质的电化学池中，在一定的电位范围内进行扫描，记录溶出伏安曲线。根据曲线中电流与AFP抗原浓度的关系，建立检测AFP的标准曲线。

三、结果与讨论

3.1纳米材料的表征

通过透射电子显微镜（TEM）对磁性微球和CdTe量子点进行表征。结果显示，磁性微球呈规则的球形，粒径分布较为均匀，平均粒径约为[X]nm。CdTe量子点也具有良好的分散性，粒径大小约为[X]nm，且具有明显的量子限域效应，在紫外-可见吸收光谱中表现出特征吸收峰。

3.2免疫传感器的电化学表征

采用循环伏安法（CV）和交流阻抗法（EIS）对免疫传感器在组装过程中的电化学特性进行考察。在裸玻碳电极上，CV曲线呈现出典型的背景电流响应。当修饰免疫磁珠后，由于免疫磁珠的导电性和表面活性，CV