CN107589203B 一种利用spe-hplc同时检测汉麻中三种大麻酚类化合物的方法 （黑龙江省科学院大庆分院）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利

(45)授权

(10)授权公告号CN107589203B公告日2020.06.02

(21)申请号201710863944.5

(22)申请日2017.09.21

(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN107589203A

(43)申请公布日2018.01.16

(73)专利权人黑龙江省科学院大庆分院

地址163319黑龙江省大庆市高新区博学

大街45号

(72)发明人张旭高宝昌田媛石雨崔宝玉

(74)专利代理机构哈尔滨市伟晨专利代理事务所(普通合伙)23209

代理人张月

(51)Int.CI.

GO1N30/06(2006.01)

GO1N30/74(2006.01)审查员黎作佳

权利要求书2页说明书7页附图2页

(54)发明名称

一种利用SPE-HPLC同时检测汉麻中三种大麻酚类化合物的方法

(57)摘要

CN107589203B本发明属于植物成分检测方法领域，具体涉及一种利用SPE-HPLC同时检测汉麻中三种大麻酚类化合物的方法。本发明将固相萃取-高效液相色谱法应用到汉麻中大麻酚类化合物的检测，可同时检测汉麻中三种大麻酚类化合物，并对其进行定性和定量分析。本发明首先确定高效液相色谱条件，通过对混合标准品溶液的检测绘制三种大麻酚类化合物的标准曲线、确定线性回归方程；再对汉麻样品进行固相萃取除杂，最后对样品进行高效液相检测并通过计算得出汉麻中三种大麻酚类化合物的含量。本发明固相萃取将待测大麻酚类化合物与杂质分离，减少杂质对检测的影响，为液相检测提供了良好基础。本发明检

CN107589203B

CN107589203B权利要求书1/2页

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1.一种利用SPE-HPLC同时检测汉麻中三种大麻酚类化合物的方法，其特征在于该方法步骤如下：

一、确定高效液相色谱条件：所述高效液相色谱条件为：

C18反相柱：4.6×150mm,5μm;柱温：40℃;检测波长：220nm;洗脱方式：等度洗脱；流动相：甲醇：0.1%甲酸=80:20;流速：1mL/min;进样量：20μL;

二、配制混合标准品溶液：配制同时含有相同质量浓度的三种大麻酚类化合物CBD、CBN、THC且质量浓度依次为0.05μg/mL、0.5μg/mL、2μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL的混合标准品溶液；

三、确定线性回归方程：将步骤二配制的各浓度混合标准品溶液依次采用步骤一高效液相色谱条件进行检测，以保留时间定性，根据各浓度所测峰面积的大小与其浓度的对应关系绘制标准曲线，并分别确定三种大麻酚类化合物的线性回归方程，所述三种大麻酚类化合物的线性回归方程为：

CBD:Y=74725X+38049,n=8,R2=0.9992,X的适用范围：0.05-80μg/mL;

CBN:Y=116969X+24626,n=7,R2=0.9995,X的适用范围：0.05-60μg/mL;

THC:Y=72297X+21790,n=7,R2=0.9992,X的适用范围：0.05-60μg/mL;

其中：Y为大麻酚类化合物所对应的峰面积，X为大麻酚类化合物的质量浓度，n为绘制标准曲线时的不同混合标准品浓度取值个数，R2为线性相关性系数；

四、制备固相萃取预处理样品：将汉麻样品进行干燥粉碎处理，取汉麻样品粉末于离心管并加入甲醇，采用超声协助萃取汉麻样品粉末中的大麻酚类化合物；离心处理萃取液并取上清液以甲醇定容，得到固相萃取预处理样品；

五、固相萃取：采用保留干扰物的固相萃取模式，将步骤四得到的固相萃取预处理样品加入C18/500mg固相小柱，流动相为甲醇，流速1mL/min,压力为0.1MPa,等度洗脱，收集流出液；用少量色谱级甲醇对所述固相小柱进行淋洗，收集流出液；

六、高效液相色谱检测：将步骤五收集的流出液混合并以甲醇重新定容，膜过滤后采用步骤一高效液相色谱条件进行检测，测得样品中各组分的峰面积，以保留时间定性，根据步骤三确定的线性回归方程定量，计算样品中三种大麻酚类化合物CBD、CBN、THC的浓度，由此计算出汉麻样品中三种大麻酚类化合物CBD、CBN、THC的含量。

2.根据权利要求1所述一种利用SPE-HPLC同时检测汉麻中三种大麻酚类化合物的方法，其特征在于步骤