分子生物学--DNA复制.pptVIP

第二章基因的分子特性;第一节遗传物质特性;嘧啶Pyrimidines;☉核苷（nucleotide）;☉核苷酸（nucleotideacid）;第二节DNA结构;一、DNA分子的一级结构

(DNAsequence);RNA在高pH时则稳定性很差

——由于2’－OH导致的水解;C、主链是亲水的，侧链（碱基）是疏水的

主链的脱氧核糖的羟基能与水形成氢键，而磷酸基团在

生理条件下离解为负离子

这些特点保证了多核苷酸链可形成稳定的构象;DNA结构的3种模型;2.双螺旋的主链;C-G;以中心为轴，向右盘旋（直径2nm）

碱基是扁平结构，位于内部，成对且垂直于螺旋轴

双螺旋中存在大，小沟;;Pitch

34?;?大、小沟的差异;A;;超螺旋结构的方向性;B-DNA;;;Invitro;不同构型的DNA沉降系数和迁移率不同;负Superhelix?

?

OC,L,DNA?

?

正Superhelix;第三节DNA的物理、化学性质;一、DNA分子变性(DNAdenaturation);2、变性过程的表现

¤是一个爆发式的协同过程，变性作用发生在一个很

窄的温度范围

¤导致一些理化性质发生剧烈变化;1.185;Marmur-Dotyformula;注意事项:;②OD260的应用：

;3、影响Tm值的因素;※嘌呤嘧啶的排列顺序对双螺旋结构（稳定性）的影响;Purine-PyrimidineStepsHaveExtensiveBaseStacking;?生物体内仅UAA为最有效的终止密码子;（3）大片段D.SDNA分子之间比较;（6）盐浓度的影响;Tm↑;pH~12;4、常用的变性方法;D.SDNA;影响DNA复性过程的因素：;3’-ATCTATGCTGTCAT-5’;三、MolecularHybridization

(核酸,蛋白质分子杂交);1、定义(核酸分子杂交，“DNA印迹杂交”);;2、分子杂交的检测;3、杂交形式固相杂交（滤膜）液相杂交;SouthernBlotting的过程

1.碱变性的琼脂糖凝胶电泳分离的DNA

2.通过电泳液的移动转移胶中的DNA

3.固定胶中的DNA

4.预杂交和杂交（放射性和荧光检测）

5.结果检测;传统和现代杂交实验示意图;DIG分子示意图;学生杂交实验结果;1975E.M.Southern;Western印迹（免疫印迹）;检测重组体克隆的菌落杂交技术;Insituhybridization;Southernblot;四、基因组的大小和C值悖理;☆C值（C-value）：在真核生物中，每种生物的单倍

体基因组的DNA总量总是恒定的，称为C-值

【C-valueisthequantityofDNAinthegenome

(perhaploidsetofchromosomes).】;;之一：物种之间形态学的复杂性与C值不成正相关;第四节真核生物DNA序列类型;一、高度重复序列（Highlyrepetitivesequence）;由2-20bp组成

重复单位串排列;果蝇（Drosophila）卫星DNA;小卫星重复单位小于25bp，重复次数为5-50次，长度达1－5kb。;限制性内切核酸酶概念;Southern印记;限制性片断长度多态性技术(RFLP)

—第一代DNA指纹技术;☆微卫星DNA（MicrosatelliteDNA）;;PCR-STR——第二代DNA指纹技术;亲子鉴定实例;用于亲子鉴定的STR位点的基本情况;2、中度重复序列(middlerepetitivesequence);rDNAgenefamily;低等真核生物10-20%

高等植物80%repetitivesequence

高等动物50%;生物相对复杂性与;本章内容结束，谢谢！