CN114599787A 利用酿酒酵母（Saccharomyces Cerevisiae）从简单前体原料可持续生产大麻素 （新加坡国立大学）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN114599787A(43)申请公布日2022.06.07

(21)申请号202080071220.7

(22)申请日2020.10.12

(30)优先权数据

62/914,0582019.10.11US

(85)PCT国际申请进入国家阶段日

2022.04.11

(86)PCT国际申请的申请数据

PCT/SG2020/0505842020.10.12

(87)PCT国际申请的公布数据

WO2021/071439EN2021.04.15(71)申请人新加坡国立大学

地址新加坡新加坡市下肯特岭路(72)发明人林杰翰吴珮如姚文山

(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师马丛

(51)Int.CI.

C12N9/10(2006.01)

C12N15/54(2006.01)

C12N1/21(2006.01)

权利要求书2页说明书14页序列表19页附图13页

(54)发明名称

利用酿酒酵母(SaccharomycesCerevisiae)从简单前体原料可持续生产大麻素

(57)摘要

CN114599787A一种酿酒酵母的重组细胞，其基因组中包含编码大麻素生物合成途径基因的核酸。大麻素由重组细胞在大麻素前体底物存在下产生，并且大麻素生物合成途径基因中至少一个来自大麻以

CN114599787A

使用的起始元件

C3

丙酸

C4

丁酸

C5

使用的延长元件

丙二酸

丙二酸

在酿酒酵母

中检测到的

产品

X

√

2,4-二羟基-6

一丙基-苯甲酸

√

0LA侧链上的建议的R基

戊酸

C6

己酸

C7

庚酸

C8

辛酸

C9

壬酸

C10

癸酸

丙二酸

丙二酸

丙二酸

丙二酸

丙二酸

丙二酸

二羟基戊基苯甲酸√

√

X人人

x

CN114599787A权利要求书1/2页

2

1.一种酿酒酵母的重组细胞，在其基因组中包含多个核酸，每个核酸编码大麻素生物合成途径基因，其中大麻素由所述重组细胞在大麻素前体底物存在下产生，并且至少一个所述大麻素生物合成途径基因来自大麻以外的生物体。

2.根据权利要求1所述的重组细胞，其中所述多个核酸中的一个编码异戊烯基转移酶。

3.如权利要求2所述的重组细胞，其中所述异戊烯基转移酶是链霉菌NphB。

4.如权利要求2所述的重组细胞，其中所述异戊烯基转移酶具有SEQIDNO:8-11中任一氨基酸序列或具有与SEQIDNO:8-11至少70%一致性的具有异戊烯基转移酶活性的氨基酸序列。

5.如权利要求1所述的重组细胞，其中所述多个核酸中的一个编码CoA连接酶，所述CoA连接酶选自红花烟草(Nicotianatabacum)4-香豆酰-CoA连接酶、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalstri)苯甲酸-CoA连接酶和天蓝色链霉菌(Streptomyces

coelicolor)苯乙酸-CoA连接酶。

6.如权利要求5所述的重组细胞，其中所述CoA连接酶具有SEQIDNO:1-3中任一氨基酸序列或与SEQIDNO:1-3至少具有70%一致性且具有CoA连接酶活性的氨基酸序列。

7.如权利要求1所述的重组细胞，其中所述多个核酸中的一个编码丙二酰CoA合成酶(MCS)、橄榄醇合成酶(OLS)和二羟基戊基苯甲酸环化酶(OAC)。

8.如权利要求7所述的重组细胞，其中所述MCS具有SEQIDNO:5的氨基酸序列或与SEQIDNO:5具有70%一致性且具有MCS活性的氨基酸序列。

9.如权利要求1所述的重组细胞，其中所述大麻素前体底物选自表1中列出的大麻素前体底物。

10.如权利要求9所述的重组细胞，其中所述大麻素前体底物为丁酸、戊酸、己酸、庚酸或辛酸。

11.一种生产大麻素的方法，所述方法包括将如权利要求1所述的重组细胞与大麻素前体底物接触并培养所述重组细胞。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述大麻素前体底物选自表1中列出的大麻素前体底物。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述大麻素前体底物为丁酸、戊酸、己酸、庚酸或辛酸。

14.如权利要求11所述的方法，其中所述多个核酸中的一个编码异戊烯基转移酶。

15.如权利