CN114057552A 一种检测用大麻二酚标准物质的制备的方法 （黑龙江冠卓检测科技有限公司）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN114057552A

(43)申请公布日2022.02.18

(21)申请号202111381554.7

(22)申请日2021.11.22

G01N1/40(2006.01)

G01N21/64(2006.01)

(71)申请人黑龙江冠卓检测科技有限公司

地址150028黑龙江省哈尔滨市松北区科

技创新城创新一路2727号711室

(72)发明人吴迪陈成张敬轩吕文彪董海天

(51)Int.CI.

C07C37/68(2006.01)

C07C39/23(2006.01)

CO7C37/86(2006.01)

C12Q1/6895(2018.01)

C12Q1/686(2018.01)

C12N15/11(2006.01)

GO1N1/28(2006.01)

权利要求书2页说明书10页序列表1页GO1N

权利要求书2页说明书10页序列表1页

(54)发明名称

一种检测用大麻二酚标准物质的制备的方法

(57)摘要

CN114057552A本发明提供了一种检测用大麻二酚标准物质的制备方法。选取酚类物质基因相对表达量为7.0以上的工业大麻叶片并制浆，取5.0g该叶片浆样品与100mL质量分数80%的甲醇溶液，置于三角瓶中超声处理，时间15min、功率149W,然后在0.09MPa、65℃条件下，减压蒸馏除甲醇后备用。选取枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌，制备复合直投式发酵剂。复合直投式发酵剂的添加量为发酵物料重量的0.01%,36℃静止发酵24h。发酵液经离心后取上清液经正己烷萃取后氮吹干燥，然后经甲醇溶解取上清液备用。制备表面均匀分布羟基的活化硅胶固相萃取柱，将上述上清液经

CN114057552A

CN114057552A权利要求书1/2页

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1.一种检测用大麻二酚标准物质的制备方法，其特征是：选取酚类物质基因相对表达量为7.0以上的工业大麻叶片并制浆，取5.0g该叶片浆样品与100mL质量分数80%的甲醇溶液，置于三角瓶中超声处理，时间15min、功率149W,然后在0.09MPa、65℃条件下，减压蒸馏除甲醇后备用，选取枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌，制备复合直投式发酵剂，复合直投式发酵剂的添加量为发酵物料重量的0.01%,36℃静止发酵24h,发酵液经离心后取上清液经正己烷萃取后氮吹干燥，然后经甲醇溶解取上清液备用，制备表面均匀分布羟基的活化硅胶固相萃取柱，将上述上清液经固相萃取柱分离后，获得一种检测用大麻二酚标准物质，经检测纯度范围为92.2%-98.5%。

2.根据权利要求1所述一种检测用大麻二酚标准物质的制备方法，其特征是：PCR反应体系和条件为：

反应体系：

SYBRGreen,Mix和引物混合物配制：

Mix

10μl

PrimerF+R

1μl

SYBRGreen(16μl)96孔板配制：Mix+引物

cDNA

8μl

8μl

反应条件：40个循环95℃预变性

95℃变性58℃复性72℃延伸

溶解曲线：60℃

95℃60℃

10min

10s

34s

1min

60s

30s

15s。

3.根据权利要求1所述一种检测用大麻二酚标准物质的制备方法，其特征是：直投式发酵剂采用这样方法制备：分别取10mL0.9%的生理盐水于2只试管内，经121℃灭菌15分钟冷却至30℃,将2株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9%的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用；分别取200mL上述两种培养基于2只500mL三角瓶内，121℃灭菌15分钟冷却至30℃,按培养基体积的10%接种2.2.1步骤中已经活化的菌种，在36℃培养箱内静止培养24h,作为母发酵剂；分别取上述两种培养基，分装于2只500mL三角瓶内，每瓶200mL,121℃灭菌15分钟冷却至36℃,分别按2%体积比例接种母发酵剂，36℃培养24-28h,检测2株菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数≥10?个/mL,视同为发酵成熟，如果活菌数10?个/mL,继续培养，直至达到10?个/mL;将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm,加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥