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·1398·浙江临床医学2025年9月第27卷第9期

·经验交流·

骨髓活检组织免疫组织化学制片若干质量问题分析

王天香胡溢朱莉艳杨万锐耿艳华*周美玲吴千叶

临床病理诊断中，免疫组织化学（immunohistochemistry，较大的组织切片，程序设定虽一致，但产生效果却不同者约

IHC）检测通过实现对目标抗原的定位、定性及定量分析，辅占IHC总制片的0.05%、约占骨髓IHC制片的12%。在手工

助完成相关疾病的病理诊断与鉴别诊断，对肿瘤的分类、分操作过程中，可重复性不佳约占17.25%。抗原修复效果未达

化，病变组织来源确定，发现微小病灶及预后判断提供重要预期者约占14.4%。孵育条件控制不规范者约占1%。DAB显

参考，并为相关化学、免疫及靶向治疗方案提供依据［1-2］色时间过长产生背景、显色不足造成偏差合计约1%。

。制

片质量的优劣将直接影响疾病的诊断和治疗方案的制定。其3 讨论

原理是利用抗原与抗体特异性结合，使标记抗体显色来确定

组织细胞内外的特异性抗原［3］因“返砂”导致刀痕及褶皱，不但破坏组织宏观形态，

。然而，IHC制片质量在不同

条件下受多种因素影响，易导致结果不准确甚至引起误判，染色中还易出现非特异性着色。此现象常因脱钙时间不足或

影响诊断的准确性。本文分析以骨髓活检为主的IHC制片过Bouin氏液部分失效导致脱钙不彻底，故需对蜡块进行二次

程中的各种质量问题，为有效提高IHC制片质量提供参考。脱钙处理。骨髓组织造血细胞成分复杂、分期比例也常有不

同，因此对脱钙方法有着较为严苛的要求，若处理不当，尤

1 资料与方法其是脱钙液配比欠精准、脱钙程度欠佳，均会导致脱钙失当

1.1临床资料收集2023年1月至2025年2月本院病理而影响诊断。脱钙不足易使组织过硬难以切全且易脱片。脱

科IHC染色45570张/次中，共计重复制片288张，占比约钙时间过长或浓度过高致脱钙过度会使细胞肿胀、变形、甚

6.3‰，上机制片23912张/次，重复比例约6.9‰，手工制至破裂，细胞内抗原结构受损，分布也会随之改变甚至丢失，

使IHC结果出现假阴性［4］

片21658张/次，重复比例约5.7‰，其中骨髓活检351例，。同时组织中的钙盐过度去除，会

IHC制片4533张/次，重复制片35张，重复比例约7.7‰。导致组织基质破坏、胶原纤维等支持结构受损，组织变得松

1.2方法回顾性分析以骨髓活检组织为主的IHC重复制散，与载玻片的黏附力下降而脱片。在对抗原影响小、脱钙

片存在的问题并行分析与改进。骨髓活检标本经Bouin氏液所需时间相对较短的前提下，采用0.9%盐酸乙醇脱钙液：浓

（组成：饱和苦味酸75mL，甲醛25mL，冰醋酸5mL）固定、盐酸20mL+75%乙醇2000mL。乙二胺四乙酸（EDTA）脱

脱钙处理，标本经10%中性福尔马林固定、常规脱水、包钙液脱钙效果较好，但脱钙时间长，一般需10~15d，甚至更

埋，3~4μm切片、贴片，60~65℃烤片1h。上机设备：罗长，无法满足当前诊断周期的要求。与30%甲酸甲醛脱钙液

氏全自动多功能组织病理检测仪（BenchMarkXT）。手工IHC相比，0.9%盐酸乙醇的脱钙效果亦较好，且由于其脱钙时间

采用EnVision法。所有切片均由3位高年资病理医师完成阅相对较短，能减少组织损伤，更有利于保