子宫颈癌PAX1联合JAM3双基因甲基化检测专家共识.pptxVIP

子宫颈癌PAX1联合JAM3双基因甲基化检测专家共识精准检测，守护女性健康

目录第一章第二章第三章背景与共识概述样本采集与处理规范实验室检测流程

目录第四章第五章第六章质量控制体系检测报告与解读临床应用场景

背景与共识概述1.

宫颈癌筛查现状与挑战传统筛查方法的局限性：HPVDNA检测仅能确认感染状态，无法区分一过性感染与病变进展，且对非HPV相关宫颈癌存在漏诊风险；TCT检测受样本质量及病理医师主观判断影响，灵敏度不足，尤其对绝经后女性及3型转化区病变漏诊率高。临床需求未满足：现有筛查手段难以精准分层高风险人群，导致低风险患者过度治疗（如不必要的阴道镜活检），而高风险患者可能延误干预时机。技术升级迫切性：随着宫颈癌早筛早诊理念深化，亟需高灵敏度、高特异性的分子标志物检测技术，以弥补传统方法的不足。

共识发布机构与目的明确实验室操作流程、质控要求及样本处理规范，确保检测结果的可重复性与可靠性。统一技术标准提出甲基化检测在HPV阳性分流、ASC-US管理、隐匿病变辅助诊断等四大核心场景的应用建议，优化诊疗决策。指导临床实践整合检验、病理、妇产等多领域专家意见，形成跨学科共识，提升筛查效率与准确性。促进多学科协作

分子机制优势早期预警价值：PAX1/JAM3甲基化是宫颈细胞癌变早期的关键分子事件，其水平变化可提示HPV持续感染及病变进展风险，较传统方法更早识别高危人群。表观遗传特异性：甲基化修饰直接调控基因表达，与组织学改变高度相关，对高级别病变（CIN2+）的检测灵敏度和特异度显著优于细胞学检查。临床应用价值精准风险分层：通过甲基化水平量化评估，区分HPV阳性患者中的低风险（一过性感染）与高风险（潜在CIN2+）人群，减少过度诊疗。无创便捷性：基于宫颈脱落细胞检测，适配基层医疗机构推广，可作为大规模筛查的补充手段，提升覆盖率。疗效监测潜力：术后甲基化水平动态变化可预测治疗效果及复发风险，为随访策略提供分子依据。双基因甲基化检测意义

样本采集与处理规范2.

采集工具标准化必须使用专用宫颈脱落细胞采集刷，确保细胞获取量充足且避免污染。医生采样时需旋转刷头5-8圈，自采样本需严格遵循图示操作规范。采集时机限制月经期、急性生殖道感染期间禁止采样；采样前48小时需避免性生活、阴道冲洗及局部用药，以防干扰检测结果。特殊人群注意事项妊娠期女性、子宫全切术后患者及严重宫颈萎缩者需评估适用性，必要时采用特殊采集手法或替代检测方案。采集要求与禁忌

样本必须立即置于含DNA稳定剂的专用保存管中，确保DNA在常温下72小时内不降解，保存液体积需完全浸没刷头。保存液选择运输过程中保持4-25℃环境，避免冷冻或高温（＞30℃），极端温度会导致甲基化位点不稳定。温度控制采集后24小时内送达实验室为佳，最长不超过72小时；延迟送检需记录时间偏差并备注说明。时效性要求使用生物安全三级包装，外层需标注生物样本标识，随附完整的样本信息单和冷链监控记录。运输包装规范保存与运输标准

拒收干燥样本、保存液浑浊样本或信息不全样本，需记录拒收原因并通知临床重新采样。实验室接收标准预处理流程质量控制指标样本需先涡旋震荡30秒使细胞充分悬浮，再经2000rpm离心5分钟去除杂质，最后用磁珠法提取DNA。提取DNA浓度需≥5ng/μL，A260/A280比值在1.7-2.0之间，甲基化阳性对照样本CT值应≤35。样本处理注意事项

实验室检测流程3.

磁珠法富集DNA推荐使用磁珠法进行核酸提取，该方法能高效富集短片段DNA，特别适合甲基化检测中易降解的DNA片段，确保后续分析的准确性。避免DNA降解在提取过程中需严格控制操作时间和温度，避免DNA因长时间暴露或反复冻融而降解，影响甲基化位点的完整性。质量控制提取后的DNA需进行浓度和纯度检测，确保OD260/280比值在1.8-2.0之间，以保证后续重亚硫酸盐转化和PCR扩增的可靠性。010203核酸提取方法

第二季度第一季度第四季度第三季度转化效率验证内参基因选择标准化操作流程避免过度转化重亚硫酸盐转化是将未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶的关键步骤，需通过Sanger测序或甲基化特异性PCR验证转化效率，确保未甲基化位点完全转化。在转化过程中需加入内参基因（如ACTB），以监控转化效率和DNA完整性，避免假阴性或假阳性结果。转化条件（如温度、时间、试剂浓度）需严格标准化，确保不同批次间结果的可比性。过度转化可能导致DNA片段断裂，影响后续PCR扩增，因此需优化转化时间并定期校准设备。重亚硫酸盐转化验证

qPCR检测与阈值设定荧光探针设计：针对PAX1和JAM3基因的甲基化位点设计特异性荧光探针，确保探针与目标序列的高亲和性，减少非特异性扩增。阈值循环数（Ct值）设定：通过标准曲线确定Ct值的合理范围，甲基化阳性样本的Ct值应低于预设阈值