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细菌内毒素检查
（凝胶法）
细菌内毒素检查法
凝胶法
方法分类 浊度法
光度法
显色基质法
重现性好
方法特性能定量
能控制药物的增强/抑制干扰
操作简便。节省时间
原理：
利用鲎血液中的变性细胞，经裂解液和机械方式促使细胞破裂而提取到的一种细胞溶解物，能与极微量的细菌内毒素形成特异凝胶反应，反应的速度和凝胶的坚固程度与内毒素浓度有关.
细菌内毒素检测之凝胶法
实验程序
1、试验准备：试剂、仪器及用具
2、内毒素限值的确定
3、确定最大有效稀释倍数
4、凝胶限度试验
5、结果判定
要求
1、以最终产品为检测必要
（浓度超过0.5mg/ml）
2、检测样品PH应在6~8之间，不符应调整
1、试验准备：试剂、仪器及用具
仪器与器具
电热恒温水浴锅、定时钟、去热源枪头和小玻璃瓶、移液枪、试管架、剪刀、锡箔纸。
试剂
细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水、鲎试剂。
2、内毒素限值的确定
L=K/M
式中L为供试品的细菌内毒素限值，一般以EU/ml、EU/mg或EU/U表示；K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kg·h）表示；M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/（kg·h）、mg/（kg·h）或U/（kg·h）表示。一般由供试品提供者直接提供内毒素限值如1000EU。
3、鲎试剂灵敏度复核
按下表制备溶液A、B、C，使用稀释倍数为MVD的供试品溶液来制备溶液A，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。
B
C
A
A
鲎试剂
200ul
100ul
100ul
100ul
标准品
100ul
供试品
100ul
100ul
操作注意事项
试验前准备：
1、玻璃器具应规范化，便于除热原、计量准确、清洗操作方便。
2、用于内毒素检测的稀释试管最好用玻璃试管；塑料用具只能为一次性且保证无内毒素。
实验环境：最好在洁净室或洁净工作台内进行，保证环境温度、湿度及通风稳定。
实验人员：戴干净手套和口罩。
5、恒温器的温度变化应1℃，鲎试剂与样品混匀后应立即移入水浴槽，严格控制保温时间在60±2min，保温期间不得移动试管架，桌面保持平稳，周围不能有振颤因素。
结果判断：恒温结束后，取出试管或反应瓶缓缓倒转180°，不从管壁脱落为阳性，不能保持完整即使有部分脱落者也判为阴性。
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