CN113966395B 工程化的生产细胞系及其制备和使用方法 （阿尔特拉吉尼克斯制药公司）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN113966395B(45)授权公告日2025.07.04

(21)申请号202080028310.8

(22)申请日2020.04.09

(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN113966395A

(43)申请公布日2022.01.21

(30)优先权数据

62/833,5482019.04.12US

62/839,2072019.04.26US

62/979,4832020.02.21US

(85)PCT国际申请进入国家阶段日

2021.10.12

(86)PCT国际申请的申请数据

PCT/US2020/0274892020.04.09

(87)PCT国际申请的公布数据

WO2020/210507EN2020.10.15

(73)专利权人阿尔特拉吉尼克斯制药公司地址美国加利福尼亚州

(72)发明人奥布里·R·蒂尔南尼古拉斯·里查兹

(74)专利代理机构中科专利商标代理有限责任公司11021

专利代理师高丽娜张启程

(51)Int.CI.

C12N7/02(2006.01)

(56)对比文件

WO2023077078A1,2023.05.04

RichardsN等.HeLa3.0:CRISPR

knockoutofgenesmodulatingtiterin

establishedrAAVproducingcelllines.

《MolecularTherapy》.2020,第28卷(第4S1期),第239页.

审查员叶繁

权利要求书4页说明书34页序列表63页附图15页

(54)发明名称

工程化的生产细胞系及其制备和使用方法

(57)摘要

CN113966395B本申请涉及重组腺相关病毒(rAAV)包装细胞系和/或生产细胞系，其已经被工程化以降低一种或多种基因和/或蛋白的表达和/或活性以增加

CN113966395B

CN113966395B权利要求书1/4页

2

1.一种重组腺相关病毒(rAAV)包装细胞系和/或生产细胞系，与相应未修饰的亲本细胞相比，其包含具有KCNN2的表达降低的细胞，或者具有KCNN2的表达降低和RGMA、ATP5EP2、LINC00319、CYP3A7、ABCA10、NOG、SPANXN3、PGA5、MYRIP或NALCN-AS1的表达降低的细胞。

2.根据权利要求1所述的rAAV包装细胞系和/或生产细胞系，其中使用核酸酶、双链RNA(dsRNA)、小干扰RNA(siRNA)、小发夹RNA(shRNA)、微RNA(miRNA)或反义RNA寡核苷酸(ASO)使所述表达降低。

3.根据权利要求1所述的rAAV包装细胞系和/或生产细胞系，其中采用包含选自序列SEQIDNO:1-11中任一个的核苷酸序列的siRNA使所述表达降低。

4.根据权利要求3所述的rAAV包装细胞系和/或生产细胞系，其中采用在有义链中包含SEQIDNO:7的核苷酸序列和在反义链中包含SEQIDNO:38的核苷酸序列的siRNA使KCNN2的表达降低。

5.根据权利要求3所述的rAAV包装细胞系和/或生产细胞系，其中RGMA的表达降低，并且所述siRNA在有义链中包含SEQIDNO:9的核苷酸序列和在反义链中包含SEQIDNO:40的核苷酸序列。

6.根据权利要求3所述的rAAV包装细胞系和/或生产细胞系，其中ATP5EP2的表达降低，并且所述siRNA在有义链中包含SEQIDNO:1的核苷酸序列和在反义链中包含SEQIDNO:32的核苷酸序列。

7.根据权利要求3所述的rAAV包装细胞系和/或生产细胞系，其中LINCO0319的表达降低，并且所述siRNA在有义链中包含SEQIDNO:2的核苷酸序列和在反义链中包含SEQIDNO:33的核苷酸序列。

8.根据权利要求3所述的rAAV包装细胞系和/或生产细胞系，其中CYP3A7的表达降低，并且所述siRNA在有义链中包含SEQIDNO:3的核苷酸序列和在反义链中包含SEQIDNO:34的核苷酸序列。

9.根据权利要求3所述的rAAV包装细胞系和/或生产细胞系，其中NOG的表达降低，并且所述siRNA在有义链中包含SEQ