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天然药物化学实验指导及考核标准

一、前言

天然药物化学实验是天然药物化学教学体系中不可或缺的重要组成部分，旨在通过实践操作，加深学生对天然药物中有效成分的化学性质、提取分离原理及结构鉴定方法的理解与掌握。本指导及考核标准依据教学大纲要求，结合实验教学特点制定，旨在规范实验教学过程，培养学生严谨的科学态度、熟练的实验技能、良好的实验习惯以及分析问题和解决问题的能力，为其今后从事相关领域的研究与开发工作奠定坚实基础。

二、实验指导

（一）实验基本要求

1.预习制度：实验前必须认真预习实验指导书及相关理论知识，明确实验目的、原理、步骤、关键操作及注意事项，预测可能出现的实验现象及结果。未预习或预习不充分者，教师有权暂停其本次实验。

2.实验态度：应具备严谨求实的科学态度，积极主动参与实验，独立思考，勇于探索。实验过程中要仔细观察，如实记录，不得随意涂改实验数据。

3.安全第一：严格遵守实验室各项规章制度，熟悉消防器材的位置及使用方法。注意用电、用火、用水安全，规范操作各类仪器设备及化学试剂。对有毒、易燃、易爆物品的使用，须在教师指导下进行。

4.操作规范：实验操作应严格按照规程进行，仔细称量、准确移取、规范安装仪器。注意仪器的正确使用与维护，发现仪器故障应立即报告教师，不得擅自拆卸。

5.实验记录：实验记录应及时、准确、完整、清晰。内容包括实验日期、室温、实验名称、原理、操作步骤、观察到的现象、原始数据、图谱照片及初步分析等。

6.实验报告：实验结束后，应按时独立完成实验报告。报告内容应包括实验目的、原理、主要仪器与试剂、详细操作步骤、实验结果与讨论、结论及思考题解答等。要求文字通顺，图表规范，讨论深入。

7.实验室整洁：实验台面应保持清洁、整齐，实验废弃物须分类倒入指定容器，不得随意丢弃。实验结束后，应清洗实验器皿，整理实验台，关闭水、电、气等。

（二）常用实验技术与操作

1.提取技术

*溶剂提取法：是天然药物有效成分最常用的提取方法。应根据被提取成分的极性选择适宜的溶剂（如石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、水等）。常用方式包括浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续回流提取法（索氏提取器）。操作时需注意溶剂用量、提取温度、提取时间及搅拌等因素对提取效率的影响。

*水蒸气蒸馏法：适用于具有挥发性、能随水蒸气蒸馏而不被破坏、与水不反应且难溶或不溶于水的成分的提取，如挥发油、某些小分子生物碱等。操作时需注意装置的气密性，防止倒吸。

*升华法：适用于具有升华性的成分，如游离蒽醌、香豆素等。操作时需控制温度，避免被升华物分解或被杂质污染。

2.分离纯化技术

*溶剂分配法：利用混合物中各成分在两种互不相溶（或微溶）溶剂中分配系数的差异，使成分得到分离。操作时应注意选择合适的溶剂系统，充分振摇，静置分层清晰后再进行分液。

*沉淀法：通过加入某些试剂使混合物中某种成分生成沉淀而与其他成分分离。如铅盐沉淀法、酸碱沉淀法、溶剂沉淀法等。应注意沉淀剂的用量、加入方式及反应条件。

*结晶与重结晶法：是纯化固体成分的重要方法。利用混合物中各成分在某种溶剂中的溶解度随温度变化差异较大的特性，通过溶解、趁热过滤、冷却结晶等步骤实现纯化。关键在于选择适宜的溶剂，控制结晶条件（如温度、时间、搅拌速度等）。

*色谱法

*薄层色谱（TLC）：常用于成分的定性鉴别、检识和指导柱色谱分离。操作包括制板、点样、展开、显色等步骤。注意点样量、展开剂的选择与配制、展开缸的饱和、显色剂的使用等。

*柱色谱：是分离纯化复杂天然产物的主要手段。常用固定相有硅胶、氧化铝、聚酰胺、葡聚糖凝胶等。操作包括装柱（干法、湿法）、上样、洗脱（梯度洗脱或等度洗脱）、收集等步骤。应注意柱床的均匀性，避免气泡和断层；洗脱剂的极性梯度选择；流速控制等。

3.检识与结构初步鉴定技术

*化学定性反应：利用特定的化学试剂与某类成分产生特征性颜色反应或沉淀，进行初步检识。操作时应注意试剂的浓度、加入顺序、反应温度和时间。

*薄层色谱检识：除用于指导分离外，还可通过与已知对照品在同一板上展开，比较其Rf值和显色行为进行定性。

*熔点测定：对于结晶性成分，熔点是重要的物理常数，可用于初步鉴定和判断纯度。

（三）实验项目示例（简要流程与要点）

*实验一：某天然药物中总生物碱的提取与检识

*流程：药材粉碎→酸水渗漉/煎煮→渗漉液/煎液浓缩→碱化→有机溶剂萃取→浓缩得总生物碱→薄层色谱检识。

*要点：酸水浓度，渗漉速度，碱化pH值的控制，萃取溶剂的选择与用量，TLC板的制备与展开条件。

*实验二：某天然药物中黄酮类成分的提取、分离与鉴定

*流程：