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水稻CYP90D2/D2基因：从图位克隆到油菜素内酯合成功能解析

一、引言

1.1研究背景与意义

水稻（OryzasativaL.）作为世界上最重要的粮食作物之一，为全球近一半人口提供主食，在我国这一比例更是超过65%，其在保障国家粮食安全和农业生产中占据着举足轻重的地位。随着全球人口的持续增长以及耕地面积的不断缩减，粮食需求量刚性增长与粮食增产边际成本持续增高的矛盾日益突出，再加上蝗灾、洪水、极端气候等不利因素的影响，提高水稻产量已成为解决未来全球粮食安全问题的关键举措。

株高作为影响水稻产量的关键因素之一，对水稻的生长发育和产量形成有着重要影响。适当的株高不仅有利于提高水稻的生物量，增强其抗倒伏能力，还能增加产量。上世纪六七十年代，半矮化水稻新品种在生产上的广泛应用，极大地提高了水稻的产量，被誉为水稻上的“绿色革命”。矮化突变体由于其独特的表型，成为研究水稻矮化机制的理想材料。通过对矮化突变体的研究，能够深入揭示水稻株高调控的遗传和分子机理，为水稻矮化育种提供理论基础和基因资源。

油菜素内酯（Brassinosteroid,BR）作为一种重要的植物甾醇类激素，在植物生长发育过程中发挥着广泛而关键的作用，如促进细胞分裂与伸长、调控维管束分化、影响花粉发育和育性以及植株衰老等。在水稻中，BR对株高的调控作用尤为显著，其合成途径中的关键基因的突变往往会导致水稻株高的改变。CYP90D2/D2基因作为油菜素内酯合成途径中的关键基因，编码一个关键合成酶，对其进行深入研究，有助于揭示油菜素内酯合成途径对水稻株高的调控机制。

本研究旨在通过对水稻油菜素内酯合成途径中的关键基因CYP90D2/D2进行图位克隆及功能分析，深入揭示该基因在水稻矮化机制中的作用，为水稻矮化育种提供理论依据和基因资源，具有重要的理论意义和实践价值。一方面，通过对CYP90D2/D2基因的研究，可以丰富我们对油菜素内酯合成途径及水稻株高调控分子机制的认识；另一方面，该研究成果有望为水稻矮化育种提供新的基因靶点和技术手段，有助于培育出具有优良株型和高产潜力的水稻新品种，从而提高水稻产量，保障全球粮食安全。

1.2国内外研究现状

在水稻矮化突变体研究方面，国内外学者已取得了丰硕的成果。自上世纪中叶以来，陆续发现并报道了众多水稻矮化突变体，这些突变体在株高、节间伸长、叶片形态等方面表现出多样化的表型。例如，我国科学家发现的“矮脚南特”，其矮化性状显著，成为了水稻矮化育种的重要亲本材料。通过对这些矮化突变体的遗传分析，揭示了矮化性状大多受单基因或多基因控制。然而，大多数已报道的矮化突变体为半矮化类型，对极端矮化突变体的研究相对较少，其遗传及分子机理尚不完全清楚。

关于油菜素内酯合成途径的研究，经过几十年的努力，已取得了一系列重大进展。目前，已基本阐明了从鲨烯前体最终生成油菜素内酯的反应过程，包括早期C-6氧化前途径与晚期C-6氧化后途径。在该合成途径中，多个关键酶和基因被相继鉴定和克隆，如CYP90家族基因、DWF4基因等。这些基因的突变会导致油菜素内酯合成受阻，进而影响植物的生长发育，表现出矮化、叶夹角变小等表型。

在CYP90D2/D2基因相关研究方面，已有研究表明该基因编码的蛋白参与油菜素内酯的合成过程。在一些植物中，CYP90D2/D2基因的表达水平与油菜素内酯含量密切相关，其表达受到光、激素等多种因素的调控。然而，在水稻中对CYP90D2/D2基因的研究还相对较少，尤其是该基因在水稻矮化机制中的具体作用及调控网络尚未明确。目前，对于CYP90D2/D2基因如何影响油菜素内酯合成途径以及与其他株高调控基因之间的相互关系，仍有待进一步深入探究。

综上所述，当前水稻矮化突变体、油菜素内酯合成途径及CYP90D2/D2基因相关研究虽已取得一定成果，但在极端矮化突变体的遗传及分子机理、CYP90D2/D2基因在水稻中的功能及调控机制等方面仍存在不足和空白，亟需开展深入研究以填补这些知识缺口。

1.3研究目的与内容

本研究的目的是通过对水稻油菜素内酯合成途径中的关键基因CYP90D2/D2进行图位克隆及功能分析，深入揭示该基因在水稻矮化过程中的作用机制，为水稻矮化育种提供坚实的理论依据和丰富的基因资源。

具体研究内容包括以下几个方面：

突变体表型分析：对从组织培养中获得的水稻极端矮化突变体进行详细的表型观察和分析，涵盖株高、节间伸长、茎杆粗细、叶倾角、叶片形态、育性等多个农艺性状。同时，利用细胞学技术，观察突变体节间细胞、叶片细胞的形态结构，从细胞层面探究矮化表型的形成原因。此外，测定突变体叶片的色素含量，借助电镜观察叶绿体的形态结构，深入解析叶片深绿表型的内在机制。

基因图位克隆：构建以突