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结核分枝杆菌38kDa抗原特异TCR基因修饰iNKT细胞的特性与活性探究

一、引言

1.1研究背景

结核病是一种由结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB）感染引起的慢性传染病，严重威胁着全球公共卫生。据世界卫生组织（WHO）统计，全球约四分之一的人口感染过结核分枝杆菌，每年新增结核病患者约1000万例，死亡人数高达150万例。我国是结核病高负担国家之一，结核病患者数量众多，防控形势严峻。尽管目前已有抗结核药物和疫苗，但耐药菌株的出现以及现有治疗手段的局限性，使得开发新的治疗方法迫在眉睫。

结核分枝杆菌是一种胞内寄生菌，具有高度的变异性和逃逸机制，能够逃避宿主的免疫监视和清除，这使得结核病的治疗和预防面临巨大挑战。结核分枝杆菌感染人体后，可在巨噬细胞内生存和繁殖，引发复杂的免疫反应。机体内结核杆菌的清除需要固有免疫和适应性免疫共同作用，其中T细胞在适应性免疫应答中发挥着关键作用。

iNKT细胞是一种特殊的淋巴细胞亚型，具有独特的T细胞受体（TCR），能够识别由CD1d分子提呈的糖脂类抗原。iNKT细胞不仅具有固有免疫细胞的快速反应特性，还能像适应性免疫细胞一样对特异性抗原产生应答，因此被认为是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。在结核病的病理过程中，iNKT细胞可以发挥重要的免疫调节作用，调节Th1/Th2细胞免疫反应，促进巨噬细胞清除内源性MTB等作用。研究表明，iNKT细胞能通过分泌细胞因子IFN-γ调节巨噬细胞发挥抗结核作用，也能通过分泌TNF-α和GrB发挥细胞毒作用。此外，iNKT细胞还参与肉芽肿的形成，抑制结核杆菌的扩散。然而，在结核感染过程中，iNKT细胞的功能会受到抑制，其增殖能力减弱，免疫活性下降，无法有效控制结核分枝杆菌的生长。因此，如何增强iNKT细胞的功能，提高其对结核分枝杆菌的免疫应答，成为结核病治疗的研究热点之一。

TCR基因修饰技术是一种新兴的基因治疗方法，通过将特异性TCR基因导入免疫细胞，使其能够识别和杀伤特定的靶细胞。结核分枝杆菌的38kDa抗原是一种重要的免疫原性蛋白，在感染早期即可被宿主免疫系统识别。利用TCR基因修饰技术将38kDa抗原特异的TCR导入iNKT细胞中，有望提高iNKT细胞对38kDa抗原的识别和反应能力，从而增强其抗结核作用。

1.2研究目的与意义

本研究旨在构建结核分枝杆菌38kDa抗原特异TCR基因修饰的iNKT细胞，并对其活性进行研究，为结核病的治疗提供新的策略和方法。具体研究目的如下：

筛选和克隆结核分枝杆菌38kDa抗原特异的TCR基因；

构建携带38kDa抗原特异TCR基因的逆转录病毒载体，并转染iNKT细胞，获得TCR基因修饰的iNKT细胞；

检测TCR基因修饰iNKT细胞对38kDa抗原的识别和反应能力，以及其对结核分枝杆菌感染细胞的杀伤活性；

探讨TCR基因修饰iNKT细胞在体内的抗结核作用及机制。

本研究具有重要的理论意义和实践价值。在理论方面，深入研究TCR基因修饰iNKT细胞的抗结核免疫效应，有助于揭示iNKT细胞在结核病免疫中的作用机制，丰富结核病免疫学理论。在实践方面，TCR基因修饰iNKT细胞有望成为一种新型的细胞治疗产品，为结核病患者提供更有效的治疗手段，改善患者的预后，减轻社会和家庭的负担。此外，本研究的成果还可能为其他感染性疾病和肿瘤的细胞治疗提供借鉴和参考。

1.3国内外研究现状

近年来，国内外学者对结核分枝杆菌38kDa抗原特异TCR基因修饰iNKT细胞及其活性进行了一系列研究。在TCR基因的筛选和克隆方面，Liu等通过噬菌体展示技术，成功筛选出结核分枝杆菌38kDa抗原特异的TCR基因，并将其导入T细胞中，获得了能够特异性识别38kDa抗原的T细胞。在载体构建和细胞转染方面，Jiang等构建了携带38kDa抗原特异TCR基因的逆转录病毒载体，并将其转染到iNKT细胞中，获得了TCR基因修饰的iNKT细胞。在细胞活性检测方面，研究表明，TCR基因修饰的iNKT细胞能够特异性识别和杀伤表达38kDa抗原的结核分枝杆菌感染细胞，分泌大量的细胞因子，如IFN-γ、TNF-α等，增强对结核分枝杆菌的免疫应答。

在国内，南方医科大学的马骊教授团队开展了“抗原特异TCR基因修饰iNKT细胞的抗结核免疫效应研究”，通过构建TCR基因修饰的iNKT细胞，研究其在体内外的抗结核免疫效应，为结核病的治疗提供了新的思路和方法。此