CN118813715B 一种来源于细胞内的靶向纳米囊泡的制备方法和应用 （天津医科大学眼科医院）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN118813715B(45)授权公告日2025.01.10

(21)申请号202411303408.6

(22)申请日2024.09.19

(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN118813715A

(43)申请公布日2024.10.22

(66)本国优先权数据

202311252113.62023.09.26CN

(73)专利权人天津医科大学眼科医院

地址300392天津市滨海新区新产业区华

苑产业园区榕苑路1号

(72)发明人张晓敏李柏宜樊蕊嫣张慧

李筱荣

(74)专利代理机构北京领科知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11690

专利代理师张丹王立红

(51)Int.CI.

C12N15/867(2006.01)

C12N5/10(2006.01)

CO7K19/00(2006.01)

A61K9/51(2006.01)

A61K47/46(2006.01)

A61K47/62(2017.01)

A61P27/02(2006.01)

A61P37/02(2006.01)

(56)对比文件

CN116515905A,2023.08.01

CN114712396A,2022.07.08CN115282286A,2022.11.04审查员陈佩

权利要求书1页说明书31页序列表(电子公布)附图21页

(54)发明名称

一种来源于细胞内的靶向纳米囊泡的制备方法和应用

(57)摘要

CN118813715B本发明公开了一种来源于细胞内的靶向纳米囊泡的制备方法和应用。本发明所述细胞内纳米囊泡产量大，粒径小，粒径分布范围窄，作为载体负载药物时具有更高的包封率和载药率，在玻璃体腔注药方式下分布的范围和程度更广，例如在玻璃体腔注射形式下负载的药物可更快被吸收，在医药领域中具有非常好的应用和研究价值。特别是，本发明赋予了细胞内纳米囊泡靶向性，通过对Lamp2b的改造使其携带靶向肽，获得具有靶向性的细胞内纳米囊泡。本发明提供的纳米囊泡，产量大，靶向性强，可更高效地发挥治疗

CN118813715B

质粒转染

质粒转染转染MSC

A25-Lamp2b-sIVs纯化

EAU处理

TCR/MHC11

复合物

CN118813715B权利要求书1/1页

2

1.一种来源于细胞内的靶向纳米囊泡的制备方法，其包括以下步骤：

(1)将编码靶向分子-Lamp2b的融合蛋白的核苷酸引入细胞；

(2)取步骤(1)所得细胞分散在悬浮溶剂中，进行超声处理；

(3)将步骤(2)所得液体进行一次或多次离心处理，弃去细胞膜及细胞器碎片，取上清液；

(4)将步骤(3)所得上清液进行超速离心处理，取沉淀为细胞内纳米囊泡，

步骤(2)中所述超声处理的振幅为20%-25%,和，所述超声处理的时间为10-20s;

步骤(3)中所述离心处理的次数为两次，

其各自参数分别为：

1000-3000g,5-20分钟；

10000-30000g,20-40分钟；

步骤(4)中所述超速离心处理的参数包括100000-180000g,50-100分钟，

所述的靶向分子选自A25多肽或RGD多肽，所述细胞为干细胞，所述干细胞为间充质干细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)包括：构建过表达靶向分子-Lamp2b的融合蛋白的质粒，然后将所述质粒包装成慢病毒，将所述慢病毒转染细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的靶向分子位于Lamp2b的N端。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述超声处理的振幅为20%;和/或，所述超声处理的时间为15s,on2s,off2s。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述间充质干细胞包括：脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、胎盘和羊水以及羊膜间充质干细胞。

6.根据权利要求1-5任一项所述方法制备的囊泡。

7.根据权利要求6所述的囊泡，其特征在于，所述囊泡为A25-Lamp2b过表达修饰的细胞内纳米囊泡或RGD-Lamp2b过表达修饰的细胞内纳米囊泡。

8.根据权利要求1-5任一项所述方法制备的囊泡作为药物