免疫学检测的干扰因素和处理策略专家共识.pptxVIP

免疫学检测的干扰因素和处理策略专家共识精准识别与科学应对干扰

目录第一章第二章第三章干扰因素概述识别干扰因素的方法类风湿因子的干扰与处理

目录第四章第五章第六章嗜异性抗体的干扰与处理其他干扰因素分析总结与策略整合

干扰因素概述1.

定义与常见类型抗动物抗体干扰：包括人抗鼠抗体（HAMA）等，通过桥连捕获抗体与标记抗体导致假阳性，或阻碍夹心结构形成导致假阴性。常见于接触动物源性治疗药物（如单克隆抗体）的个体，抗体类型涵盖IgG、IgA、IgM等。抗微生物抗体干扰：如大肠杆菌感染者的IgMλ异常蛋白，可非特异性结合检测抗体，导致cTnI、TSH等指标假阳性。需通过添加无关抗体或甲醛处理样本消除干扰。嗜异性抗体干扰：具有多重特异性的低亲和力抗体，在夹心法中桥连固相与标记抗体引发假阳性，竞争法中干扰较小。需结合病史排除无明确免疫原接触史的案例。

当检测值异常升高/降低且无合理解释时（如cTnI极高但无心梗症状），需考虑抗动物抗体或嗜异性抗体干扰。结果与临床不符时排查同一患者连续检测结果波动大（如TSH骤升骤降），可能提示存在未被识别的干扰因素。动态监测矛盾同一标本在不同品牌试剂盒中结果差异显著（如HAMA干扰仅影响鼠源性抗体系统），需通过交叉验证识别干扰。不同检测系统差异非特异性干扰物（如RF）在稀释后影响减弱，而真实高浓度分析物应呈线性变化，借此区分干扰与真实结果。稀释法验证识别的重要性

内源性干扰主导性：嗜异性抗体和自身抗体占内源性干扰70%以上，需优先建立标准化阻断方案。补体干扰隐蔽性：补体通过变构效应引发假阳性，常规质控易漏检，建议高危项目标配灭活步骤。溶血处理时效性：血红蛋白干扰在采样后2小时内最显著，急诊标本应优先检测或快速处理。生物素剂量阈值：当血清生物素30ng/ml时显著干扰检测，服用维生素B7患者需停药48小时。脂血分级处理：轻度脂血（TG500mg/dl）可超速离心，重度需联合脂质吸附和稀释法。技术对抗策略：化学发光法抗干扰优于ELISA，新型纳米抗体可减少嗜异性抗体交叉反应。干扰因素类型主要干扰物质典型影响处理策略内源性干扰嗜异性抗体假阳性/假阴性使用阻断剂或特异性抗体预吸附内源性干扰自身抗体负相关影响稀释标本或采用封闭试剂内源性干扰补体抗体变构导致假阳性加热灭活或添加EDTA外源性干扰溶血非特异性显色重新采样或使用血红蛋白清除剂外源性干扰脂血光散射干扰超速离心或脂质吸附处理外源性干扰生物素竞争性结合干扰调整孵育时间或使用中和试剂对检测结果的影响

识别干扰因素的方法2.

复测法：通过使用具有不同结合位点的其他方法或来自不同物种的抗体进行复测，比较两种方法的结果差异来判断干扰因素的存在。例如，在ELISA检测中，更换抗体来源或方法学可排除非特异性结合干扰。重测法：采用不同检测系统对样本进行重测，但需注意不同平台间的方法学差异（如化学发光与电化学发光）。若结果不一致，可能提示存在类风湿因子或嗜异性抗体干扰。稀释法：通过梯度稀释样本观察浓度变化是否成比例。若稀释后结果非线性偏离（如CA72-4检测中稀释液选择不当导致假性增高），可提示基质效应或钩状效应干扰。010203常用识别技术（复测法、重测法、稀释法）

直接检测法利用特异性试剂盒检测样本中自身抗体（如类风湿因子）或嗜异性抗体的存在。例如，通过抗人IgM/IgG试剂可识别IgM型类风湿因子对ELISA的干扰。采用不同物种来源的阻断剂（如小鼠、兔IgG）处理样本，比较阻断前后结果。若阻断后信号显著降低（如HCG检测中嗜异性抗体干扰），可确认干扰来源。将热变性IgG加入样本稀释液，可封闭类风湿因子的Fc段结合位点，减少其对夹心法免疫检测的假阳性干扰。针对IgM型干扰抗体，添加0.1mol/L2-巯基乙醇可降解其结构，例如在TORCHIgM抗体检测中避免假阳性结果。多物种阻断法热变性IgG处理2-巯基乙醇降解自身/嗜异性抗体识别（直接检测、阻断法）

大分子干扰物识别（混合法、沉淀回收法、凝胶过滤法）将患者样本与已知低值样本混合（如巨分子TSH与甲减血清混合），若回收率异常（85%-97%区间外），提示存在大分子复合物干扰。混合法使用25%PEG6000沉淀后检测上清，回收率低于40%（如hs-cTnI检测中20%）表明大分子干扰物存在。PEG沉淀回收试验作为金标准，通过分子量分离技术（如鉴别巨泌乳素）直接确认大分子复合物的存在，适用于复杂干扰案例的最终验证。凝胶过滤层析

类风湿因子的干扰与处理3.

类风湿因子（RF）可与检测系统中的IgGFc段非特异性结合，导致信号异常增强。例如，在双抗体夹心ELISA中，RF可能桥接捕获抗体和标记抗体，形成虚假阳性信号。高浓度RF可能竞争性结合抗原表位或封闭抗体结合位点，抑制正常抗原-抗体反应。尤其在竞争性免疫分析法中，R