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生物制药AKTAavant自动化操作指南

前言

AKTAavant系统作为生物制药领域广泛应用的层析纯化平台，其自动化操作不仅能显著提升实验效率、保障结果的重现性与准确性，更能减轻操作人员的工作强度，降低人为误差。本指南旨在为生物制药实验室的科研及生产人员提供一份专业、严谨且实用的AKTAavant自动化操作参考，帮助使用者更好地驾驭系统性能，确保层析过程的顺利进行与目标产物的高效纯化。请在操作前务必熟悉本指南内容及系统操作规程，并严格遵守相关安全规范。

一、实验前准备与系统检查

实验前的充分准备与细致的系统检查是确保自动化层析实验成功的基石。这一步骤不仅关系到实验数据的质量，更直接影响系统的安全运行。

1.1实验方案确认与材料准备

*方案了然于胸：在启动任何操作前，务必清晰理解本次层析实验的目的、采用的层析方法（如离子交换、凝胶过滤、亲和等）、预期的步骤流程及关键工艺参数（如流速、梯度、pH、电导、上样量等）。

*材料准备与核查：

*层析柱：确认层析柱的型号、规格、柱效及保存状态是否符合实验要求。新柱或长期未用的柱子需按照说明书进行恰当的平衡与预处理。

*缓冲液：根据实验方案精确配制所需的各种缓冲液（平衡液、洗脱液、再生液、清洗液等）。确保所有缓冲液均经过适当的过滤（通常0.22μm或0.45μm滤膜）和脱气处理，以避免气泡对系统和层析过程的干扰。标记所有缓冲液，注明名称、浓度、pH值、配制日期及有效期。

*样品：确保待纯化样品已按要求预处理（如离心、过滤），并明确其体积、浓度及上样方式。

*耗材：准备好合适的进样管、收集管、接头、密封圈等一次性或备用耗材。

1.2系统硬件连接与检查

*电源与接地：确认系统主电源连接正确、稳定，且接地良好，这是保障仪器安全和操作人员安全的首要条件。

*流动相管路：

*检查各缓冲液瓶（A、B、C、D等）是否已正确放置，并确保液位充足。

*按照实验方案，将相应的缓冲液管路正确插入对应的缓冲液瓶中。检查管路是否有破损、老化或扭结现象。

*确保所有管路连接紧密，无松动或漏液隐患。特别注意泵头入口、混合器、检测器流通池等关键部位的连接。

*层析柱安装：

*小心取出层析柱，检查柱身有无裂纹，柱两端接头是否完好。

*按照层析柱上标示的流向（通常箭头指示），正确安装于系统的层析柱位。确保连接紧密，避免死体积过大或漏液。旋紧接头时力度适中，防止损坏螺纹或柱接口。

*检测器与收集器：

*检查紫外/可见检测器、pH计、电导检测器等是否连接正常，流通池内有无气泡或污染物。

*确认自动收集器（如Frac-900或Frac-950）的托盘/试管架安装正确，收集管摆放整齐。

*排气：检查系统各模块（如泵、混合器）是否需要预先排气，特别是在更换新缓冲液或长时间停机后。

1.3Unicorn软件启动与初步设置

*打开计算机，启动Unicorn软件。首次启动或系统更新后，软件可能会进行自检，请耐心等待。

*登录软件，选择合适的用户权限。

*在软件界面中，确认与AKTAavant主机的连接状态。若连接失败，请检查网络或USB连接，并尝试重新连接。

*创建新的实验项目（Project）和实验（Experiment），或打开已有的项目文件，以便后续数据的保存与管理。

二、方法编辑与参数设置

方法编辑是实现AKTAavant自动化操作的核心环节。一个完善的层析方法应包含所有必要的操作步骤和精确的控制参数。

2.1新建或调用方法模板

*在Unicorn软件的“Method”模块下，可以选择“NewMethod”创建全新方法，或从“MethodLibrary”中调用已有的相似方法模板进行修改，以提高效率并保证方法的一致性。

*为新建方法命名，命名应具有描述性，便于识别和追溯。

2.2系统参数全局设置

*FlowPath（流路设置）：根据实验需要选择合适的流路，例如是否启用样品环（SampleLoop）、是否使用特定的检测器组合等。

*PressureLimits（压力上限设置）：为整个方法或特定步骤设定系统允许的最高操作压力。该值应参考层析柱的最大耐压、管路承受能力及缓冲液特性综合设定，确保系统运行安全。

*TemperatureControl（温控设置）：若实验需要对层析柱或样品进行温度控制，需在此处设置并启用相应的温控模块（如Columnoven）参数。

2.3步骤编辑与关键参数详解

Unicorn软件采用“步骤（Step）”式的方法结构，每个步骤代表一个具体的层析操作单元（如平衡、上样、洗脱等）。

*AddStep（添加步骤）：