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细胞有丝分裂和减数分裂实验指导

一、实验目的

1.观察植物细胞有丝分裂的各个时期，识别不同分裂时期的形态特征，加深对有丝分裂过程的理解。

2.观察动物细胞减数分裂的各个时期，识别减数分裂各阶段的染色体行为变化，理解减数分裂的遗传学意义。

3.掌握临时装片的制作技术和显微镜的熟练使用及绘图技能。

4.比较有丝分裂与减数分裂过程的异同点，阐明其生物学意义。

二、实验原理

细胞分裂是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。真核细胞的分裂方式主要包括有丝分裂和减数分裂。

有丝分裂是体细胞增殖的主要方式。在有丝分裂过程中，细胞核内的遗传物质（染色体）经过复制，精确地平均分配到两个子细胞中，使子细胞与母细胞具有相同的染色体数目和遗传信息，从而保证了细胞遗传的稳定性。整个过程可分为间期和分裂期（前期、中期、后期、末期）。具有分裂能力的植物组织，如根尖分生区、茎尖分生区细胞，是观察有丝分裂的理想材料。通过适当的固定、解离、染色和压片等处理，可以使细胞分散并清晰显示染色体，便于在显微镜下观察各分裂时期的特征。

减数分裂是配子发生过程中进行的一种特殊的有丝分裂。其特点是细胞连续分裂两次，而染色体只复制一次，最终形成的子细胞（配子）染色体数目比母细胞减少一半。减数分裂不仅是保证物种染色体数目稳定的机制，也是物种适应环境变化、实现遗传多样性的重要方式。减数分裂过程复杂，可分为减数第一次分裂（前期I、中期I、后期I、末期I）和减数第二次分裂（前期II、中期II、后期II、末期II）。动物的精巢或卵巢中的生殖细胞是观察减数分裂的常用材料。

三、实验材料与用具

（一）实验材料

1.洋葱根尖（或大蒜根尖）：用于观察植物细胞有丝分裂。

2.蝗虫精巢（或其他动物精母细胞减数分裂永久装片）：用于观察动物细胞减数分裂。

（二）实验用具

1.光学显微镜、载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、刀片、培养皿、滴管、吸水纸、铅笔（HB、2B、3B）、绘图纸。

2.恒温水浴锅（或酒精灯）。

（三）实验试剂

1.卡诺氏固定液（无水乙醇：冰醋酸=3:1）或70%乙醇：用于固定细胞，保持染色体形态。

2.10%盐酸溶液：用于解离植物组织，使细胞分散。

3.改良苯酚品红染液（或醋酸洋红染液、龙胆紫染液）：用于染色染色体。

4.清水。

四、实验方法与步骤

（一）植物细胞有丝分裂的观察（以洋葱根尖为例）

1.根尖培养与取材：

*实验前3-4天，将洋葱鳞茎底部接触清水，置于温暖处培养，待根长至约1-2厘米时取材。

*选择生长健壮的根尖，在上午9-10点或下午2-4点（此时细胞分裂旺盛），用刀片切取根尖前端约2-3毫米（乳白色部分，即分生区）。

2.固定（可选步骤，若需长期保存或当天材料分裂相不多时进行）：

*将切取的根尖放入卡诺氏固定液中固定2-24小时。

*固定后的根尖用70%乙醇冲洗，可在70%乙醇中于4℃保存备用。若当天实验，新鲜材料可省略固定，直接进行解离。

3.解离：

*将根尖放入盛有10%盐酸的小培养皿中，在60℃左右水浴中解离8-15分钟（或室温下解离更长时间）。解离的目的是溶解细胞间的果胶质，使组织细胞分散开来。

*解离适度的标准：根尖变得酥软，用镊子轻轻挤压，根尖易分散。

4.漂洗：

*将解离好的根尖用镊子取出，放入盛有清水的培养皿中漂洗3-5次，每次约1分钟，彻底洗去盐酸，防止其继续解离影响染色。

5.染色：

*将漂洗干净的根尖放在载玻片中央，用吸水纸吸去多余水分。

*用滴管滴加1-2滴改良苯酚品红染液，染色5-10分钟。染色时间要适中，过浅染色体不易观察，过深则背景着色过深，影响观察效果。

6.制片：

*染色完成后，用吸水纸吸去多余染液（注意不要吸走根尖）。

*加1-2滴清水于根尖上，盖上盖玻片。

*在盖玻片上覆盖一层吸水纸，用拇指（或铅笔的橡皮头）轻轻按压盖玻片，使细胞分散成单层，染色体展开。压片时用力要均匀，避免盖玻片破裂或细胞浆溢出。

7.观察：

*将制好的装片先置于低倍镜（10×物镜）下观察，寻找根尖分生区细胞。分生区细胞的特点是：细胞呈正方形或近正方形，排列紧密，细胞核大，细胞质浓。

*在低倍镜下找到分裂相较多的区域后，转换至高倍镜（40×物镜）仔细观察。辨认间期及分裂期的前期、中期、后期、末期细胞，并注意各时期染色体的形态和分布特点。

*绘制所观察到的典型分裂时期细胞图，并注明时期和主要结构。

（二）动物细胞减数分裂的观察（以蝗虫精巢为例，或观察永久装片）

1.取材与固定（若使用新鲜蝗虫精巢）：

*选取性成熟的雄性蝗虫，剪开腹部，取出精巢小管（通常为黄色或乳白色的团状结构）。

*将精巢