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尼帕病毒实验室检测技术方案

尼帕病毒（Nipahvirus,NiV）属于副粘病毒科

（Paramyxoviridae）亨尼帕病毒属（Henipavirus）的成员，病

毒颗粒呈多形性，直径150-300nm，最外层为脂蛋白包膜，核衣

壳呈螺旋对称。基因组为单股负链RNA，全长约18.2kb。尼帕病

毒只有一个血清型，根据病毒基因组序列特征可分为M亚型（马

来西亚亚型）和B亚型（孟加拉亚型）。

尼帕病毒的检测方法包括病毒核酸检测、抗体检测（IgM、IgG

和中和抗体等）和病毒分离等。由于尼帕病毒的高致病性，病毒

的分离培养需要在生物安全四级（BSL-4）实验室进行，采集的病

毒相关样本的实验室检测需要在生物安全三级（BSL-3）实验室灭

活后方可进行。

一、检测对象

1.疑似病例、确诊病例及其密切接触者。

2.涉疫地区的媒介生物（果蝠、猪等）和食品（猪肉制品、

水果蔬菜等）；原产地近期涉疫的进口食品（猪肉制品、水果蔬

菜等）。

二、技术人员基本要求

（一）采样人员。

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从事尼帕病毒实验室检测的标本采集技术人员应当经过生

物安全培训（培训合格），熟悉标本种类和采集方法，熟练掌握

标本采集操作流程及注意事项，做好标本信息的记录，确保标本

质量符合要求、标本及相关信息可追溯。

（二）检测人员。

实验室检测技术人员应当经过生物安全培训（培训合格），

熟悉标本种类、标本处理和相应的检测技术，以保证及时、熟练

地进行实验和报告结果，保证结果的准确性。

三、标本采集、保存和运输

（一）病例标本采集。

对怀疑感染尼帕病毒的患者，要尽早采集脑脊液、血液、尿

液、鼻拭子和咽拭子。

1.脑脊液标本。

脑脊液标本由临床医师以无菌手续对腰椎穿刺抽取，然后留

取脑脊液标本于3个无菌试管中，每个试管1～2ml。保存于带螺

旋盖、内有垫圈的冻存管内，标记清楚后低温保存，其中1管用

于本地/本省生物安全三级（BSL-3）实验室检测，2管用于上级

疾病预防控制机构复核。

2.血液标本。

血液标本由临床医师用无菌真空干燥管，采集患者非抗凝血

3管，每管5ml。采集完成，标记清楚后及时置于4～8℃冰箱低

温暂存，待血清析出后及时置于-20～-80℃冰箱冻存。其中1管

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用于本地/本省生物安全三级（BSL-3）实验室检测，2管用于上

级疾病预防控制机构复核。对病例应尽可能采集双份血液标本，

两份标本之间相隔14天为宜，住院病例可于入院当天和出院前1

天各采集一份。

3.鼻拭子、咽拭子。

采样人员按照标准操作，对每一位被采集人员采集3份样本，

分别保存于带螺旋盖、内有垫圈的含2～3ml病毒保存液的采集管

中。其1管用于本地/本省生物安全三级（BSL-3）实验室检测，

其余2管用于上级疾病预防控制机构复核。

4.尿液标本。

采集尿液标本15ml，分装3管（各5ml），保存至带螺旋盖、

内有垫圈的无菌15ml离心管。其中1管用于本地/本省生物安全

三级（BSL-3）实验室检测，2管用于上级疾病预防控制机构复核。

（二）果蝠、猪、进口食品（猪肉制品、水果蔬菜）标本采

集。

采集疫区所在地的果蝠唾液、尿液；疫区所在地养殖场生猪

的鼻-咽拭子和血清。如果市场存在来自于国外疫区的进口冷冻猪

肉制品、水果蔬菜，需要采集这些进口食品的表面。填写媒介标

本采集信息表，按照采集地点、种类进行分装。

（三）标本保存、运送。

如标本能够在24小时内开展实验室检测，应将标本置于2～

8℃冰箱保存；不能及时检测的标本应尽快置于-20～-80℃冰箱保

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存。

标本运送时采用低温冷藏运输，避免冻融，样本运输应遵守

国家关于一类病原体的相关生物安全规定。

四、实验室管理基本要求

（一）实验室资质要求。

开展核酸检测的实验室，应当符合《病原微生物实验室生物

安全管理条例》（国务院令第424